文档介绍：第二军医大学
硕士学位论文
化妆品安全性评价中皮肤毒性若干替代实验方法的研究
姓名:刘珍
申请学位级别:硕士
专业:卫生毒理学
指导教师:张天宝
20090501
要摘一、小鼠局部淋巴结试验方法的改进研究皮肤是阻止有害化学物进入机体的天然屏障,同时也是易于受到伤害的器官,环境污染物、职业暴露、化妆品使用等都可能造成皮肤伤害引起局部甚至全身毒性。化妆品的使用与人类生活息息相关,其目的是保护健康和美化生活,因而有效的评价化妆品的安全性,对保障消费者健康、促进化妆品产业的发展都具有重要意义。传统的化妆品安全性评价方法采用豚鼠或兔作为受试动物,不仅需要大量的动物、耗时长、成本高,不能满足化合物快速增长的需要,而且存在敏感性不够,种属差异等缺点,特别是不符合动物保护和福利的要求。因此,按照“”原则,发展快速、高效、敏感的毒理学安全性评价替代方法成为主要的发展趋势和近几年国际上与国际接轨的化妆品替代实验方法具有非常的迫切性。种刺激阳性物:氢氧化钾⑹榛蛩崮。按常规方法对雌上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,。欧盟更提出从年缕鸾ń估枚锝谢逼返牟馐裕不允许其成员国进口经动物实验检验的产品。我国是化妆品生产和使用大国,建立能本文拟在借鉴欧盟研究成果的基础上,对化妆品安全性评价中若干皮肤毒性的替代实验方法进行研究。目的是为国内开展相关方法学研究和制定我国化妆品安全性评价替代实验方法的技术指南提供依据。目的改进小鼠局部淋巴结试验,建立既可检测化学物的致敏性也可同时检测刺激性的替代方法。方法选取一种阴性物质:北郊姿幔蝗种旅阳性物:一二硝基氯苯、.;以及两性/∈蠼腥径荆饬啃∈蠖岛穸龋诘天仁慈处死小鼠称量耳廓重量,获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用约梁屑觳饬馨拖赴增殖活性。结果受试剂量氢氧化钾、%以可能判定为对皮肤有刺激性;被雍图夯夤鹑┚薮碳ば浴H种旅粑镌谥敏试验中均呈阳性,但不同检测指标敏感性有差异。己基肉桂醛,.二硝基氯苯,
=崧鬯化学物掖肌⒈和牵作用后细胞活性ィ贓试验中,二、皮肤刺激性硼模型实验方法的建立三、赴逋庵旅粜允匝榉椒ǖ难芯氨基酚均可引起淋巴结重量增加,差异有显著性;三者均可引起淋巴细胞计数增加,但己基肉桂醛仅在最高剂量组有统计学差异;,氢氧化钾在致敏性指标中均为阴性。结论以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结试验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性,有发展成为一种替代方替代实验方法。方法取人的包皮组织,分离表皮和真皮后分别进行原代培养,用验作用笮嘌,=峁葱允匝橹校觳庾饔糜种腐蚀性化学物了帷、丙烯酸螅赴喽曰钚均皀%;而址歉葱曰四氯乙烯、丁香酚瓜赴喽活性变化不大。刺激性试验中,觳种刺激性化学物细胞相对活性,其中种化学物纫彝椤%孪赴钚悦飨孕∮ィ种非刺激性目的探讨建立以为受试细胞,以细胞表面标志物和的抗体表达改变为检测指标的体外致敏性试验方法。方法采用人单核细胞系白血病淋巴瘤细胞,经过细胞因子—诱导分化成未成熟树突状细胞后,分别致敏物、。目的通过构建重组人し裟P停⒓觳饣逼返钠し舾葱裕碳ば缘鼠尾胶原构建皮肤模型,经气液面培养后,腐蚀性试验作用和,刺激性试人重组皮肤模型实验方法基本成功,可以做为检测化学物皮肤腐蚀性/刺激性的体外替代方法。对未诱导细胞和诱导后细胞给予受试物,用流式细胞仪检测细胞表面标志物和的抗体表达改变,评价化学物对皮肤的致敏性。结果
四、利用人皮肤组织模型研究纳米的经皮吸收和致突变性体荧光表达增强,与对照相比大于ィ獺致荧光增强不明显。受试物作用经诱导后的未成熟树突状细胞,表面抗体的荧光表达量都未见明显增高。采用细胞检测和的抗体表达的试验方法,可检测中高致敏性化学物,但不适合弱致敏性化学物的评价。目的探讨纳米芊翊┩钙し糇橹⒉蛲槐渥饔谩7椒ü菇ㄈ酥刈皮肤模型后培养于小室上方,下层培养细胞,,采用微孔板豫基因突变的试验方法检测下层细胞是否发生基因突变。结果随着受试纳米浓度的增加,直接接触和间接接触细胞的相对悬浮生长率均呈下降趋势,但间接接触的细胞相对悬浮生长率普遍大于直接接触者。随着剂量的增加,平板效率和相对存活率也呈现下降趋势,但各组间的屏障作用,对皮肤组织模型下层细胞无致基因突变作用。关键词局部淋巴结试验,组织工程皮肤,皮