文档介绍：第三军医大学
博士学位论文
大鼠嗅成鞘细胞和雪旺细胞基因表达差异的研究
姓名:袁碧波
申请学位级别:博士
专业:组织学与胚胎学
指导教师:蔡文琴
20040501
第三军医大学博士学位论文
大鼠嗅成鞘细胞和雪旺细胞基因表达差异的研究
摘要
近年来对中枢神经系统再生能力的认识逐渐深入发现移植外周神经雪旺细胞
(Schwann cells SCs) 嗅成鞘细胞(Olfactory ensheathing cells OECs)均可以促进中枢轴
突再生并且发现 OECs 脊髓移植促轴突再生效果优于 SCs 表现在再生轴突的延伸
距离电生理及支持体重和运动功能的恢复等方面 OECs 抑制星形胶质细胞反应的
能力和较强的细胞迁移能力可能起了一定的作用可能还有另外的一些未被发现的因
素在同时起作用
嗅觉系统终生保持着神经再生的能力嗅神经元存活周期为 4-8 周衰老的神经
元由嗅上皮产生的新生神经元取代重新发出轴突进入中枢的嗅球与靶细胞形成突触
OECs 是伴随嗅神经形成髓鞘的神经胶质细胞与嗅神经再生进入嗅球同靶细胞形成
突触密切相关, OECs 在形态结构和功能上与 SCs 极为相似体外培养两者均可呈梭
形可以形成髓鞘都可以分泌多种神经营养因子如神经生长因子(nerve growth factor
NGF) 脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor BDNF)和睫状神经生长因
子(ciliary-derived nerve growth TF) 这两种细胞既相似又不同为我们研究
神经再生提供了一个新的思路两者进行比较可能发现有利于中枢神经再生的某些分
子
本研究以 OECs 和 SCs 为实验对象采用免疫溶解法获得两种细胞的纯培养应
用免疫细胞化学(ICC)和电镜技术观察 OECs 的抗原表达以及形态特征利用抑制消减
杂交技术(SSH)筛选两者的差异表达基因从两者的差异表达基因中分析与中枢神经再
生相关的基因表达为进一步阐述中枢神经再生机制创造条件主要结果如下
免疫溶解法获得和的纯培养
免疫溶解法纯化 2h 可见悬浮细胞增多纯化后 24h 倒置显微镜下观察成纤维细
胞少见 P75NGFr 免疫组化显示 OECs 纯度可达 95%以上继续培养 6d 后再次进行
纯化可去除大部分新增殖的成纤维细胞保持 OECs 纯度在 95%以上
技术研究的抗原表达电镜技术观察的超微结构特征
OECs 免疫组化结果显示 P75LNGFr(+) GFAP(+) NCAM(+) CDK5(-) 免疫
细胞化学特征为 P75LNGFr 染色均匀分布于整个细胞和突起核区较为浅淡 GFAP
染色较深分布于整个胞浆和突起 NCAM 免疫阳性细胞表面均有分布 SEM 显示 OECs
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核不规则呈分叶状或齿状核仁明显染色质均匀分布于核中异染色质可在核膜
下形成块状结构
技术筛选和的差异表达基因
测序结果得到了 4 个不同的已知基因分别编码肝白血病因子(hepatic leukemia
factor Hlf) 糖基化磷脂酰肌醇磷脂酶 D1(Glycosylphosphatidylinositol phospholipase D1
GPLD1) Phr1(PAM)和缝隙连接蛋白亚单位 connexin43 在 4 个已知基因中 phr1 和
hlf 与突触形成相关缝隙连接蛋白亚单位 connexin43 参与细胞间的信号传递 GPLD1
可能参与调节 GPI 锚定蛋白的功能
GPLD1 在 OECs 表达可能有利于裂解抑制轴突生长的 GPI 锚定蛋白通过消除这
些蛋白的抑制作用来促进轴突再生 phr1 hlf 和 Gjá1(connexin43)则可能参与 OECs
与轴突之间的信息交流和调控影响轴突的生长
关键词嗅成鞘细胞雪旺细胞抑制消减杂交差异表达基因
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A study on differentially expressed genes between
olfactory ensheathing cells and Schwann cells in rats
Abstract
Both olfactory ensheathing cells (OECs) and Schwann cells(SCs) provide cellular
environments that support the growth of damaged axons following t