文档介绍：实验七薄层色谱
药物化学教研室
陈永正
28/10/2010
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(硅胶)Silicon dioxide SiO2
硅胶是由美国约翰·霍普金斯大学的
化学教授Walter A. Patrick在1919年发明
的,第一次世界大战时曾被用作
防毒面具中的吸收剂。
硅胶是一种粒状多孔的二氧化硅水合物,由硅酸钠加酸后洗涤干燥制得,主要用作干燥剂以及柱色谱和薄层色谱中的吸附剂。虽名称为“胶”,它实际上是一种固体,外表呈透明或乳白色。
图一:球状硅胶
图二:球状的表面结构
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2. 薄层色谱原理
薄层色谱(Thin-layer Chromatography)原理跟其它色谱法一样,都是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附分配性质不同,或其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配等作用,从而将组分分开。(挥发性化合物 . < 100 °C不能用TLC分析)
化合物与固相作用弱,通过色谱快
化合物与固相作用强,通过色谱慢
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薄层色谱常用TLC表示,是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。它适用于几到几十毫克小量样品的分离,也用于大量样品的纯化。
a) 监测反应过程
b) 简便分离
c) 柱层析
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4,展开剂的选择
选择适当的展开剂是首要任务:
分离物质为弱极性物质,选用弱极性溶剂为洗脱剂;
分离物质为强极性成分,选用极性溶剂为洗脱剂。
展开剂的选择条件:①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③~,~;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中,黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
h1
h2
h3
Rf1 = h1/h3
Rf2 = h2/h3
溶剂极性顺序:
石油迷<己烷<甲苯<二***甲烷<三***甲烷
<***<THF<乙酸乙酯<***<乙醇<甲醇<水
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5. 显色方法
(一)通用显色剂
1,***钾——硫酸(一般有机物均能显色,不同化合物显示不同颜色)
2,碘:检查一般有机物
3,5%——磷钼酸乙醇溶液:喷后120 °C烤,还原性物质显兰色,再用氨气熏,则背景变为无色。
4,20%磷酸乙醇溶液:喷后120 °C ,还原性物质显兰色。
5,浓硫酸:甲醇(1:1)溶液,或5%硫酸的乙醇溶液,喷后100 °C烤15分钟,各种不同物质显不同颜色。
(二)茚三***试剂、生物碱显色剂、黄***苷显色剂等
紫外分析仪:
对紫外吸收物质显色
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6. 实验内容(用TLC分离顺、反偶氮苯)
反式异构体比顺式的稳定,
是主要存在形式。顺式变为反式的活化能很低(96~105千焦/摩尔)。在室温下,顺式只能存在数小时。
实验材料:硅胶薄层板、偶氮苯10%的甲苯溶液、毛细管、展开槽、正己烷、***仿等。
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7,薄层色谱操作流程图一
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7,操作流程图二
8, 操作步骤
⑴制板(以硅胶板为例)      选择合适的玻璃板(经常使用显微镜上的载玻片),依次用水和乙醇洗净,晾干。取适量薄层色谱用的硅胶,加适量蒸馏水调成糊。调制时慢慢搅拌,勿使产生气泡。将糊倒在玻璃板上,摇动摊平,晾干。使用前放入烘箱内,在105-115oC左右烘干40-50分钟。冷却后使用。     ⑵点样     将试样用最少量展开剂溶解,用毛细管蘸取试样溶液,在薄层板上点样。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限,勿使点样量过多。     ⑶展开     吹干样点,竖直放入盛有展开剂的有盖展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿,但切勿接触到样点。盖上盖子,展开。待展开剂上行到一定高度(由试验确定适当的展开高度),取出薄层板,再画出展开剂的前沿线。     ⑷显色,计算Rf值     挥发干展开剂,选择合适的显色方法显色。量出展开剂和各组分的移动距离,计算各组分的相对移动值。