文档介绍：香菇多糖的生产
香菇多糖:从香菇中分离纯化的一种葡聚糖,是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。与化疗或放疗联用可发挥增效减毒作用。
药理作用:具有免疫增强作用,其机制在体内虽无直接杀伤肿瘤细胞作用,但可通过增强机体的免疫功能而发挥抗肿瘤活性。在体内能使脾脏和腹腔的NK细胞活性增强,诱生干扰素与本品剂量相关,其活性与白细胞介素类或干扰素诱导剂有协同作用。另有证明,在体外本品可增强脱氧胸腺嘧啶核苷的抗艾滋病毒的活性。
香菇多糖通过激活巨噬细胞,增强抗体依赖性细胞诱导的细胞毒(ADDC),发挥抗肿瘤活性;此外,香菇多糖还能使肿瘤部位的血管扩张和出血,导致肿瘤出血坏死和完全退化。
一、实训目的
;
;
。
二、实训原理
在组织中,多糖多与蛋白质以共价相结合,所以在生化产品制备工艺中,往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开,以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀,也可用其他方法使变性沉淀,如适当调pH和加热等。
三、实训步骤
1、多糖的提取
取10g香菇,于组织捣碎机内,加20倍量的水,90 ℃水浴加热30min,抽滤,得滤液加活性炭(1mg/ml),搅拌吸附1h,抽滤,得滤液,用***仿萃取(3次)以除尽蛋白质,萃余液中加无水乙醇使其乙醇最终浓度为80%,沉淀12h后,于离心机中离心(4000rpm)30min,沉淀物分别用无水乙醇、***、***洗涤3次,即的香菇多糖提取物。
2、多糖纯化
Sepadex G-100凝胶充分溶胀后装柱,用蒸馏水蒸馏48h。取上述香菇多糖提取物溶于蒸馏水中,离心除去不溶物,上清液上柱分离,用蒸馏水洗脱,洗脱速度5ml/min,200nm波长紫外检测,收集主要峰部分,冷冻干燥得白色香菇多糖,并称重。
3、香菇多糖的分析检测
(1)定性分析—苯酚-硫酸法
苯酚-硫酸试剂:苯酚 3g,浓硫酸5ml,溶于95ml无水乙醇中,喷后,110℃,加热几分钟,糖显棕色。
(2)定量分析—分光光度法
A、标准曲线的制备
精密称取60℃,置于100ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,用移液管量取对照品溶液0、、、、、,分别置于50ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再各精密吸取1ml,置水浴中加热15min,取出冷却至室温,橘黄色由于浓度从小到大而逐渐加深,将溶液于490nm波长的可见分光光度计处测定吸收度,绘制标准曲线。
B、样品多糖测定
,加水溶解,定量转移入100ml溶液瓶中,加水至刻度,摇匀。,按上述实验方法显色,测定吸光度,计算香菇多糖含量。
(3)薄层层析
对照品: 香菇多糖成品。
供试品: A: 90~ 100℃热水提取的香菇多糖。
B:1M 氢氧化钠提取的水溶性香菇多糖。
C: 1M 氢氧化钠提取的非水溶性香菇多糖。
样品液与对照品液的制备: 供试品A、B 用单蒸
水配成样品液, 供试品C 用1M 氢氧化钠配成样品液,
全部样品液浓度为2mg/m l。对照品液用单蒸水配制, 浓度也为2mg/m l。