实验四醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白.ppt

文档介绍：实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
目的1、掌握电泳的基本原理
2、掌握电泳的基本操作
原理----电泳:带电颗粒在电场中泳动的现象
各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量等不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。
不用支持物的
利用支持物
1)纸电泳
2) 淀粉凝胶电泳
3) 琼脂糖凝胶电泳
4)醋酸纤维薄膜电泳
5)聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)
泳动度U
泳动度:带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度
U=v/E=dl/Vt
E:电场强度,每cm的电压降,V/l
v:颗粒的移动速度,d/t
d:颗粒的移动距离
t:通电时间
V:加在支持物两端的实际电压
l:支持物的有效长度
影响泳动速度的主要因素
1)电场强度:(越大,移动速度越快)
常压电泳:100-500V,2-10V/cm
高压电泳:500-10000V, 20-200V/cm
2)溶液的pH值:buffer。
3)溶液的离子强度: (I越大,速度越慢;缓冲
效果越好) ,-。
4)电渗现象:液体在电场中相对于固体支持物的相对移动。
尽量避免有高电渗作用的支持物。
聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)
Davis 和Ornstein 1959年---人血清蛋白
聚丙烯酰***凝胶:丙烯酰***(Acr,单体)和N,N′-甲叉双丙烯酰***(Bis,交联剂)共聚合而成(由过硫酸铵-四乙基乙二***TEMED系统或核黄素-TEMED系统激发)。
分子筛,可通过调节单体浓度或与交联剂的比例来控制孔径大小,达到不同的分离目的。
凝胶可以是平板(垂直板型)或柱子(盘状)
作用
使蛋白质成为亚基物质,形成蛋白质-SDS胶束,消除蛋白质分子之间的电荷、形状差异;椭圆棒状,,长轴正比于蛋白质分子量。
MW在15200kDa,电泳迁移率与分子量对数呈线性关系。
logM=a-bRf,Rf为迁移率