文档介绍：摘要���耐��������琀���期原虫确能诱导产生保护性抗体,这类抗体在体外能完全抑制疟原虫生长,许多疟疾目前仍然是严重威胁人类健康的寄生虫病,由于疟原虫抗药性以及蚊媒抗杀虫剂的产生和扩散,使疟疾防治面幅严重困难。因此,研制有效的疟疾疫苗已成为疟疾防治重要潜在的替代途径。研制疟疾红内期疫苗对降低疟疾的发病率和死亡率具有重要作用。针对红内期原虫免疫保护机制的研究,早期工作主要集中在体液免疫的作用。事实上红内动物试验结果也表明抗体在清除红内期原虫感染中发挥重要作用。由于红细胞表面缺乏��肿樱�虼讼赴�拘訲淋巴细胞���院炷谄谠�娌荒芊⒒有в�作用。但实验表明,在�赴�毕莸男∈竽P椭薪�忻庖吖セ鞲腥臼匝椋�峁��示免疫小鼠能产生对疟原虫攻击感染的免疫保护效力。尽管这种免疫力不能完全清除攻击感染的疟原虫,但可控制原虫密度在很低水平。显然,该免疫保护效力是由细胞免疫介导的。此外,�旷�赴��堂庖咝∈笠材芏耘痹�婀セ鞲腥静�生保护作用。这些结果表明在疟原虫的红内期免疫机制中,体液免疫和���细胞介导的细胞免疫均发挥重要的作用。近年来,许多红内期疫苗候选抗原陆续得到鉴定,但这些抗原中绝大多数是针对保护性体液免疫的抗原。最近��緊���冉��泻炷谄谠�婵乖��凶榉�化并建立各组分的���赴�废担�ü��堂庖吆凸セ鞲腥臼匝槿范�司哂斜�护保护作用的�赴�废担�⒊醪郊�ㄅ痹�娲位凄堰室荒襦堰室换凄堰室涣姿岷�糖转移酶�������为这种保护性���赴�陌锌乖�����青堰屎塑账岵咕群铣赏揪吨械囊�个酶,可催化��姿岷颂墙沽姿����豚堰史从ι�舌堰屎塑账帷T诓溉�动物体内,除有补救合成途径外,还有嘌呤核苷酸从头合成途径,但在疟原虫仅有补救合成途径,只能利用补救途径合成生命所必需的核苷酸,故而���对于疟原虫便显得尤为重要,成为广泛关注的抗疟疾药物的靶标。因此有必要制备重组蛋白建立特异�赴�废担�越�徊饺范ㄆ湎赴�庖叩拿庖弑;ぷ饔茫��在此基础上鉴定其保护性�赴�砦弧�本实验室利用毕氏酵母系统表达并纯化了恶性疟原虫���重组蛋白,�聇���第二军医大学硕士学位论文����
白与完全弗氏佐剂���榛�⒚庖連删�∈螅�诘谒暮偷诹�芤圆煌耆�胞品系。用重组�Ⅺ,�蛋白免疫��/�∈笏ú嗌现ā⑺�愕婧透鼓つ冢�在培养物中加入浓度为靴�痬�腍���乖�碳ぃ�嘌�天�私锥闻嘌��刺激期�4撕螅��恍孪释耆���嘌���尤胧柿克茄�赴���加�男��Ⅺ,�特异�赴�废怠�细胞/只、��槲��磍��狿��允酒浞肿恿吭嘉����肜砺鄯肿恿�����接近。���检测该重组蛋白可与疫区患者血清反应。本研究在此基础上,将���重组蛋弗氏佐剂���榛�鞍准忧棵庖吡酱危�⑸枇⑿∨QG灏椎鞍���和��对照组,在末次免疫�天后用约氏疟原虫进行攻击感染,自感染次日起,每日制备薄血膜镜检原虫率。结果显示对照组小鼠在攻击感染后�天全部死亡,而免疫组�%小鼠能存活并痊愈,原虫密度峰值低于对照组。��结果显示,三次免疫血清抗体滴度次第升高,至末次免疫时可达��陨稀�为研究���抗原的细胞免疫作用,我们建立了���特异性的�����旌笕∫赶隆⒏构晒怠㈦傥蚜馨徒岷推⒃嘀票傅ハ赴��航�刑逋馀嘌��鼠�境�,但不加抗原,继续培养��此阶段培养称间歇期��天后再更换��培养基,并加入抗原、饲养细胞和小鼠���嘌�天。,根据细胞增殖情况,分瓶传代。同时以小牛血清白蛋白���作为对照,建立��匾煨缘腡淋巴细胞系。采用【�】一��羧敕ḿ觳飧鱐�细胞系的淋巴细胞增殖情况。结果显示在���的刺激下,淋巴细胞出现了明显的增殖,���滴��,�.�,明显高于���抗原致敏的小鼠脾脏及淋巴结细胞的增殖��为�����砻骶��碳ぃ�湫�束�ぱ�罚�殉晒���为表明���特异�赴�拿庖弑;ぷ饔茫�颐强U沽斯�堂庖吲痹��攻击实验。实验分为三组,分别为���特异性的�馨拖赴�椤��特异的�馨拖赴�椤��组,每组�宦闶蟆>�簿猜鲎⑸銽细胞,剂量为�’����弧��后,静脉注射��际吓痹�娓腥镜暮煜�胞进行攻击感染,次日起每日制备薄血膜镜检原虫率。三组原虫率比较显示对照组原虫率上升急速,��楹蚉�组原虫率峰值分别出现在感染后第�和第�天,原虫率分别为�.�%和�.�%,而���组原虫率较为平缓,峰值出现在感染后第�天,原虫率为�.�%。比较三组小鼠生存时间显示,��榈�第二军医大学硕士学位论文���
偷�、��号小鼠分别于死于感染后第�偷�天,第�判∈笤诟腥竞蟮��天死亡;��樾∈笤诟腥竞蟮�天全部死亡,而���组小鼠生存时间明显延长,自感染后第�天开始出现死亡,至第�天时全部死亡。结果表明,���特异�赴�芸刂婆痹�婷芏仍诮系偷乃�剑�乇鹗窃诠�堂庖吆罂�始阶段作用明显,延长免疫