文档介绍：细菌形态学检查
一、不染色标本检查(压滴法)
【操作方法】
1、用接种环取大肠杆菌菌液2-3环,置于洁净载玻片中央。
2、取一张洁净盖玻片从菌液一边缓缓放下,覆盖于菌液上,避免菌液中产生气泡。
3、先用低倍镜找到观察部位,再换高倍镜观察细菌的运动。
【结果观察】
有动力:可看到细菌自一处移至另一处,有明显的方向性位移
无动力:细菌呈现布朗运动,只在原地颤动而无位置的改变
二、革兰染色法
【步骤】:制片、染色、镜检
1、制片
涂片:取洁净载玻片一张,用接种环取生理盐水2环,置于玻片上,接种环灭菌后,取细菌培养物少许与盐水混匀,并涂成均匀薄膜涂片。如用液体材料,如痰、尿液、脓汁等可直接涂片,不必加生理盐水。
干燥:涂片最好在室温下自然干燥,必要时可将标本面向上,小心间断地在弱火高处烘干,但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。
固定:涂片干燥后,将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次,共约2s~3s,注意温度不可太高,以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。
固定目的:①杀死细菌;②使菌体与玻片粘附较牢,在染色时不致被染液和水冲掉;③菌体蛋白变性易着色。
2、染色
结晶紫初染 1 min →卢戈氏碘液媒染 1 min → 95%酒精脱色 30sec~1 min →稀释石炭酸复红复染 1 min,油镜观察
【原理】:
①革兰阳性细菌细胞壁结构较致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易渗入;革兰阴性菌细胞壁结构较疏松,肽聚糖层少,脂质含量多,乙醇易渗入。
②革兰阳性菌的等电点低,革兰阴性菌的等电点较高,在相同pH条件下,革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多,与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。
③革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐,可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物,不易被乙醇脱色;而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐,吸附染料量少,形成的复合物分子也较小,故易被乙醇脱色。
【结果观察】:紫色为阳性,红色为阴性
【影响因素】
①操作因素:涂片太薄或太厚,固定时菌体过分受热,以及脱色时间长短,都会影响染色结果
②染液因素:所有染液应防止染液蒸发而改变浓度,特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用;涂片积水过多会改变染液浓度,影响染色效果
【意义】:
①鉴定细菌:可将细菌分为革兰阳性菌(紫色)和革兰阴性菌(红色),
②观察致病性:大多数G+菌以外***为主要致病物质,而G- 菌以内***为主要致病物质。两者的致病机制和临床表现各不相同,
③参考选择抗菌药物:大多数G+菌对青霉素、头孢菌素等敏感;大多数G- 菌对氨基苷类抗生素如链霉素、庆大霉素等敏感。
【用途】:一般细菌学检查或鉴定
三、细菌的形态及排列方式:
①杆菌
②球菌(包括:葡萄球菌、双球菌、链球菌、四联球菌和八叠球菌)
③螺形菌(菌体仅有一个弯曲呈弧形的螺形菌称为弧菌;菌体有数个弯曲的螺形菌称为螺菌;菌体细长、弯曲呈弧形的螺形菌称为螺杆菌)
四、细菌特殊结构的观察
芽孢:破伤风杆菌(革兰染色法)
荚膜:肺炎双球菌(革兰染色法)
鞭毛:变形杆菌(革兰染色法观察不到,需用特殊染色法,如镀银染色)
培养基的制备
【分类】
按物理性状分为:液体培养基(多用于增菌)、固体培养基(多用于分离纯化鉴定细菌)、半固体培养基(用于观察动力、短期保存)
按营养组成和用途分为:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基
【步骤和方法】:
1、计算用量,2、调配成分,3、溶解,4、校正pH值,5、分装,6、灭菌:选择合适的灭菌方法。7、质量控制:需做无菌试验和效果试验。8、保存:注明名称、日期,置冰箱或冷暗处。
【配方】
肉汤培养基:蛋白胨 1g,牛肉膏 ,NaCl ,蒸馏水定容至100ml,-,分装,高磅灭菌20分钟。有成品培养基,直接按说明操作。(作为无糖基础培养基用,适用于营养条件一般的细菌)
尿素培养基:蛋白胨 1g,NaCl 5g,葡萄糖 1g,尿素 20g,KH2PO4 2g,2 g/L 酚红 6ml,加蒸馏水定容至1000ml,,分装,低磅灭菌10分钟。
葡萄糖蛋白胨培养基:蛋白胨 7g,葡萄糖 5g,K2HPO4 5g,蒸馏水定容至1000ml,-,分装,低磅灭菌15分钟。
苯丙氨酸培养基:酵母浸膏 3g,NaCl 5g,Na2HPO4 1g,L-苯丙氨酸 2g,琼脂 12g,蒸馏水定容至1000ml,-,趁热分装成2ml/支,低磅灭菌,摆斜面。
【注意事项】
1、培养基的调配溶解:现在锥形瓶底加入少量水,再加入蛋白胨等成分,以防其粘瓶底烧结。制备大量培养基时,除玻璃容器外,还可