文档介绍：柯俊良教授简历
【学历】
台大医学院生化所博士
辅仁大学生物学研究所硕士
辅仁大学生物学系学士
【经历】
中山医学大学医学分子毒理学研究所副教授
农药药物毒物实验所药剂系博士后研究员
台大公卫学院 HLA 研究室博士研究员
中山医学院毒理学研究所助理教授
【现任】
中山医学大学医学分子毒理学研究所教授兼所长
【专长】
环境毒理﹑癌症分子生物﹑生物农药
近年来中草药在抗癌方面的能力陆续被证实,其中灵芝一直被视为传统中药的翘楚,其有效成分包括灵芝多糖体,灵芝三萜类和灵芝免疫调节蛋白等等。许多细胞核动物实验已经证实。灵芝多醣体和灵芝三萜类具有抗肿瘤等功能,而不同灵芝属菌类,如小孢子灵芝(Ganoderma microsporum)﹑赤芝(Ganoderma fucidium)和松杉灵芝(Ganodermatusgae),皆含有一大约13KDa分子量的蛋白质,它们都具有促进淋巴球增殖及刺激干扰素-γ表现量的功能,且其***基酸序列与免疫球蛋白重链区高达30﹪相识度,不具有半胱***酸(cysteine).因此不易被氧化和水解。我的授业恩师中央研究院林荣耀院士所领导的研究团队。统称这类蛋白质为『灵芝免疫调节蛋白质』。
灵芝免疫调节蛋白质可抑制端粒酶活性
提高肺癌的治疗率, 降低复发的可能
在许多癌症中可侦测到端粒酶活性,而体细胞中,除了肝细胞中通常侦测不到此酶素的活性。染色体端粒酶的再活化可使正常细胞具有高度的细胞增殖速率。进而走向不朽化,并提高正常细胞转型成恶性肿瘤的机率。更有研究进一步指出,非小细胞肺腺癌病人的端粒酶活性。与高度的细胞增殖速率和恶化程度有关。因而推测端粒酶活性是肺癌患者重要的预后表现较佳。所以端粒酶的活性控制,可能是发展新型癌症治疗策略的主要标的之一。
目前科学界对端粒酶的调控已非常清楚,特别是『端粒酶反转录酶(telomerase reversetranscriptase subunit,简称HTDRT) 』的基因表现量(mRNA),其在肿瘤组织表现很高,但在正常组织表现却特别低;如果将HTERT基因转殖到不会表现端粒酶活性的细胞株,则可使该细胞株表现出端粒酶活性,由此可以进一步推测,hTDRT的转录活化可能是调控端粒酶的主要步骤。
一般常以『染色体端粒酶重复增幅步骤(telomeric repeat amplification assay)』来侦测端粒酶的活性,结果发现。随着灵芝免疫调节蛋白浓度增加,A549肺癌细胞株端粒酶的活性明显降低。再以半定量(RT-PCR)和定量(real-lime PCR)分析,结果发现,hTERT的mRNA也会随着灵芝免疫调节蛋白浓度增加而减少。进一步以启动子荧光报告基因活性分析,结果发现,随着灵芝免疫调节蛋白浓度增加,hTERT启动子活性亦随之减少。
我们的结论显示,灵芝免疫调节蛋白处理细胞后,在基因层次上,灵芝免疫调节蛋白藉由抑制转录因子(c-Myc)与hTERT的启动子的结合(图1)降低hTERT的转录活性,最后导致端粒酶的活性丧失:在转译后修饰方面,灵芝免疫调节蛋白进到细胞的内质网,并且诱发内质网压力造成钙离子的释出钙离子的释出会抑制AKT激酶的活性,使NF-nB无法与hTERT蛋白结合进入细胞核,进而抑制端粒酶的活性。
同时使用蛋白输出抑制剂(Leptomycin B)和蛋白分解酶抑制剂(MG132),皆会阻止hTERT蛋白被带出细胞核外,并且恢复端粒酶的活性,而根据我们的研究发现,灵芝免疫调节蛋白促使hTERT蛋白坐落位置的转移,也与核输出机制有关(图1)。此外,灵芝免疫调节蛋白液会造成肺癌细胞的细胞周期停滞在G1期,并趋于未成熟的细胞衰老。
综合上述研究发现,在肺癌细胞中,灵芝免疫调节蛋白在抑制端粒酶活性的过程里,影响hTERT蛋白的坐落位置(转译后修饰的调控)。比抑制hTERT基因的表现(转录的调控)更显重要。而经由动物实验我们也证实,灵芝免疫调节蛋白确实具有抑制肿瘤生长的能力。
本实验研究结果证实,自松杉灵芝菌丝体纯化的免疫调节蛋白具有抗癌功效,此免疫调节蛋白可应用于抑制肺癌细胞的端粒酶活性,将来有机会发展出治疗或搭配其他抗癌药物一起处理,抵抗肿瘤,并减少肿瘤细胞的复发。
灵芝免疫调节蛋白对端粒酶活性的抑制作用
会促使肺癌细胞『衰老』,停滞生长
我们的研究也证实,-和H1355等肺癌细胞生长,但对人类正常细胞株则毫无影响。
研究进一步发现,灵芝免疫调节蛋白可使肺癌细胞周期停滞在G1 期,走向未成熟的衰老反应(Prematuresenescence),并明显增加ysosome胞器增大,此为衰老细胞重要特征。
一般哺乳类细胞大多会藉由两种细胞防御机制,细