文档介绍：斑贞1号、TMP和5―1表达的影响
[摘要] 目的探讨斑贞1号、川芎嗪(TMP)和五***尿嘧啶(5-FU)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/1表达的影响。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),监测人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在5-FU组、斑贞1号组、斑贞1号+5-FU组、斑贞1号+5-FU+TMP组切除修复交叉互补基因1(1)mRNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,1 mRNA表达差异无统计学意义(P>),而5-1mRNA表达量明显升高(P中国论文网/6/view-
[关键词] 胃癌;斑贞1号;TMP;5-FU;多药耐药;1基因
[中图分类号] [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2016)26-0034-03
胃癌是中国常见的恶性肿瘤之一,至今为止手术仍是胃癌的主要治疗方法,因早癌诊断率低,70%患者失去手术机会,所以化疗显得非常重要,但目前最大的问题是胃癌多药耐药性(MDR),近几年发现[1,2]1参与胃癌的多药耐药,并起重要作用,本课题组侯培珍等[3]研究结果示斑贞1号、5-FU和TMP联合对人胃癌有逆转作用。本课题采用RT-PCR方法比较人胃癌细胞(SGC-7901/ADR)1 mRNA的表达量,进一步探讨各药物组对人胃癌SGC-7901/ADR细胞的作用机制。现报道如下。
1 材料与方法
细胞系
胃癌SGC-7901/ADR细胞,第四军医大赠。
药物、试剂及主要仪器
自拟“斑贞1号”每毫升含露蜂房、山茱萸、斑蝥、 g。5-FU(规格:10 mL: g,国药准字H31020593,上海旭东海普药业有限公司)、TMP(规格40 mg,国药准字H20031302,安徽制药),RPMI1640培养基(RPMI为Roswell Park Memorial Institute缩写,1640是培养基代号,其中含有10%胎牛血清,美国GIBCO北京有限公司),二***亚砜、胰蛋白酶(美国Sigma公司产品),新生小牛血清(杭州四季青公司),两步法RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司产品),引物片段(上海生物工程公司),PCR扩增仪(Ambion 公司)、电泳仪及紫外分光度计(北京六一公司),Trizol(TakaRa公司),紫外***成像系统(上海精科实业有限公司)。
实验方法
,以5×104/mL浓度接种于6孔板上,每孔用吸管加入2 mL,然后培养24 h,然后分为五组;对照组、5-FU组、斑贞1号组、斑贞1号+5-FU、斑贞1号+ 5-FU+TMP,分别加入等量的新的培养液,5-FU稀释液、斑贞1号稀释液、斑贞1号+5-FU稀释液、斑贞1号+5-FU+TMP稀释液。培养48 h后,经过PBS缓冲液冲洗,提取总mRNA。
RT-PCR 提取细胞中的总RNA:以mRNA为模板,采用Oligo随机引物,利用逆转录酶反转录成cDNA。然后再以cDNA作为模板PCR扩增,琼脂糖电泳并拍照,分析电泳条带灰度值,检查基因mRNA转录相对量的变化。具体步骤如下:以mRNA为模板经逆转录合成cDNA, 每个反应体系25 μL, μL,Takara Taq 1 μL,10×PCR Buffer(Mg2+Plus) μL,dNTP Mixture 2 μL,ddH2O μL;各样品cDNA 5 μL, μL。经过预变性→变性→退火→延伸,(PCR扩增条件分别为94℃ 1 min,58℃ 30 s,72℃ 45 s,72℃ 10 min),共30个循环,最后延伸72℃ 10 min,扩增结束,取10 μL样品,跑电泳60 min,(经100 V恒压,2%琼脂糖)然后采集电泳图像,得出各电泳带光密度值,β-action引物正义列为5’-GTGGG A-3’,反义列为5’-TTAATACGCACGATTTC-3’1基因引物序列的正义列引5-GTATATGC-3’,反义列引物为5’-AG-CAGG-3’。
统计学方法
,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,进行方差分析及LSD-t检验,)。其他药物组与对照组相比及组间比较均有统计学意义(P<),见表1。
1和对照基因β-action的RT-PCR产物经琼脂糖分离后电泳图
切除修复交叉互补基因1(1)和对照基因(β-action)的RT-PCR产物经琼脂糖分离后分别位于354bp和548bp,见图1。
A、B、C