文档介绍：复旦大学
博士学位论文
冻存人脐静脉内皮细胞内皮化Gore-Tex人造血管
姓名:蒋红军
申请学位级别:博士
专业:儿科学/心胸外科
指导教师:贾兵
20040425
冻存人脐静脉内皮细胞内皮化人造血管中文摘要第一部分人脐静脉内皮细胞的分离和培养第二部分人脐静脉内皮细胞冷冻保存材料和方法新鲜脐带条,根据所用的消化酶,将实验分三组:单纯胰酶组;%胎牛血清液进行培养,倒置相差显微镜下观察三种消化液的消化结果灌注消化结果优于单纯胰酶及胰酶一组,各组消化时间均以种游佳;胰酶一胶原酶组脐静脉内皮细胞获得率及贴壁结果均较其它两组为优。关键词苎密讶密洋描防竺垒兰皇研究不同消化液分离人脐静脉内皮细胞效果:鉴定内皮细胞及其纯度并进行原酶组;胰酶一乙二胺四乙酸组。脐静脉内灌注消化液,分离内皮细胞;结果及所获内皮细胞贴壁生长规律;采用因子免疫荧光染色及扫描电子显微镜观察,鉴定所获内皮细胞及其纯度。扫描电镜观察及免疫染色证实所获得的细胞为内皮细胞,纯度较高。脐静脉内灌注消化液法可获取高质量的内皮细胞,体外生长良好;,胰酶涸缸橄效果最佳,最佳的消化时间以~分钟。经体外培养扩增后,可提供足够数量的内皮细胞,满足内皮化人造血管的需要。内皮细胞脐静脉细胞培养细胞分离为构建内皮化人造血管修复材料,提高内皮细胞的冷冻保存的效果,采用%:甲弧砜作为冻存保护液,进行细胞冻存及复苏过程,研究脐静脉内皮细胞根据脐静脉内皮细胞是否冷冻保存炒,随机分为冻存组及未冻存纠。目的体外培养。经冻存/复苏后的生长及生物学特性。
第三部分冻存人脐静脉内皮细胞内皮化嗽煅9冻存内皮细胞加入含%冷冻保存液,经梯度降温后,置于液氮进行保冻存细胞相似的形态结构;倒置相差显微镜观察表明,冻存脐静脉内皮细胞的生长与未冻存脐静脉内皮细胞的生长过程无明显差异;倒置相差显微镜连续观察显示,脐静脉内皮细胞经冷冻保存后仍保持正常的形态结构及贴壁生长等生长曲线与未冻存细胞的生长曲线相似,无明显差异。结论脐静脉内皮细胞经冷冻保存后保持其生物学特性及生长规律,完全能满足构用作脐静脉内皮细胞的冻存保护液。关键词方法冻存脐静脉内皮细胞经复苏,体外培养扩增,。经,,及天,冻存内皮细胞置于。∠淠冢焖俑此铡2捎锥虫蓝试验,测定复苏后脐静脉内皮细胞存活率;用癙ū昙牵经流式细胞仪检测细胞凋剩翰捎玫怪孟嗖钕晕⒕倒鄄煜赴纳す蹋痪四氮哗盐匝榛嬷颇谄は赴纳で摺结果脐静脉内皮细胞经冻存复苏后,电镜观察显示脐静脉内皮细胞仍然保持与未物学特性,与未冻存脐静脉内皮细胞相比无明显差异;脐静脉内皮细胞复苏后,细胞存活率%±%N炊炒婺谄は赴ィ任炊炒嫦赴某苫盥%±%;冻存细胞的凋亡率.%±比未冻存细胞的凋亡率.%.%愿撸秸呶尥臣蒲Р钜。冷冻保存时间长短对细胞存活率及细胞凋亡无明显的影响。复苏后的脐静脉内皮细胞的生建内皮化人造舡管的要求。含%的溶液细胞冻存效果满意,可内皮细胞细胞冻存二:甲亚砜研究冻存人脐静脉内皮细胞作为种子细胞,体外扩增后,种植于—人造血管内侧而,进行人造懿牧夏谄せ目尚行浴M毖橹ざ炒嫫昃猜瞿皮细胞用作组织程学种子细胞的可行性。随机分冻存及未冻存脐静脉内皮细胞组,共椤2眉艉鲜蚀笮Ⅱ管片,内侧面向上,固定于培养孔板底。脐静脉内皮细胞复苏后,体外培养扩增,种植于—希糜谖孪渑嘌周后取木才,进行电镜目的检查。笳撇ヾ—の冻存』縸奢谩谄は窲电内皮化』血管的.
蕺軎』—哜童¨蚋皮蜘—呐皮化人竭札普,乙耳撇ヾ—,冻存脐静脉内皮细胞经体外扩增后,,证实了冻存的脐静脉内皮细胞用作组织工程学种子细胞的可行关键词膨体聚四氟乙烯细胞冻存耆芄宦愎菇ㄗ橹こ萄а9艿男枰!5缇倒鄄煜允荆胛炊炒嫦昃猜瞿谄は赴贕猅表面生长良好,相互连接紧密,覆盖大部分—嗽煅9苣谀っ妗6炒嫫昃猜瞿谄は赴贕甌表面的生长榭鲇来冻存组无明显差异。结论冻存脐静脉内皮细胞复苏后在—,迸行—籪【内皮细胞·陛。
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