文档介绍：第九节 DNA的一级结构测定 和化学合成
一、DNA一级结构测定 (DNA sequencing)
DNA的一级结构:
多聚脱氧核苷酸链中脱氧核苷酸的排列顺序——碱基序列
DNA碱基顺序测定的主要方法
1975年,Sanger 加减法
1977年,Sanger 双脱氧终止法
1977年,Maxam & Gilbert 化学断裂法
(dideoxy method)或末端终止法(chain termination)
DNA sequencing with chain-terminating inhibitors.
Sanger, F. , Nicklen, S. & Coulson, . (1977). Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 74, 5463-7.
a second Nobel Prize in Chemistry in 1980
DNA的生物合成
参与DNA复制的主要物质
底物: dATP, dGTP, dCTP, dTTP(dNTP)
聚合酶: DNA聚合酶(DNA polymerase)
模板(template): 解开成单链的DNA母链
引物(primer): 互补于模板链的寡核苷酸片段,
提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合
子链DNA延长的方向: 5’→3’
DNA生物合成的过程
DNA聚合酶催化的反应
双脱氧核苷酸
双脱氧核苷酸的掺入终止DNA链的合成