文档介绍：实验八分光光度法条件实验及测定微量铁(5学时)*
一、目的
1、学****如何选择吸咣光度分析的实验条件。
2、掌握用吸光光度法测定铁的原理及方法。
3、掌握分光光度计的使用方法。
二、原理
1、  光度法测定的条件:分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂的用量,介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等;测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。
2、二氮杂菲-亚铁络合物:邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。在pH=2~9的条件下Fe2+ 离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物,此络合物的 lgK稳=, 摩尔吸光系数ε510=×104
在显色前,首先用盐酸羟***把 Fe3+离子还原为 Fe2+ 离子,其反应式如下:
2 Fe3++2NH2OH·HCl→2 Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl-
测定时,控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。酸度过高,反应进行较慢;酸度太低,则 Fe2+离子水解,影响显色。
Bi3+,Cd2+,Hg2+,Ag+,Zn2+等离子与显色剂生成沉淀,Ca2+,Cu2+,Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。因此当这些离子共存时,应注意它们的干扰作用。
三、试剂
100µg/mL的铁标准溶液:(SO4)2·12H2O ,置于一烧杯中,以30mL 2mol/L HCl 溶液溶解后移入1000 mL 容量瓶中,以水稀释至刻度,摇匀。
10 µg/mL的铁标准液:由100µg/mL的铁标准溶液准确移取稀释10倍而成。
盐酸羟***固体及10%溶液(因其不稳定,需临时用时配),%邻二氮杂菲(新配制),1mol/LNaAc溶液。
四、步骤
1、  条件实验
(1)吸收曲线的绘制:准确移取10 µg/mL 铁标准溶液 5mL于50mL容量瓶中,加入10%盐酸羟***1mL,摇匀,稍冷,加入1mol/L %邻二氮杂菲3mL,以水稀释至刻度,在分光光度计上,用1cm 比色皿,以水为参比溶液,用不同的波长从570 nm 开始到430nm为止,每隔10nm或20nm 测定一次吸光度。然后以波长为横坐标,吸光度为纵坐标绘制吸收曲线,从吸收曲线上确定该测定的适宜波长。
(2)邻二氮杂菲-亚铁络合物的稳定性:用上面溶液继续进行测定,其方法是在最大吸收波长(510nm)处,每隔一定时间测定其吸光度,例如在加入显色剂后立即测定一次吸光度,经30min,60min,120min后,再各测一次吸光度,然后以时间(t)为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制A-t 曲线。此曲线表示了该络合物的稳定性。
(3)显色剂浓度试验:取 50mL容量瓶(或比色管)7个,编号,用5 mL 移液管准确移取10µg/mL铁标准溶液5mL  ,于容量瓶中,加入1mL10%盐酸羟***溶液,经2 min 后,再加入5mL1mol/LNaAc溶液,%,,,,,,,用水稀释到刻度,摇匀。在分光光度计上,用适宜的波长(510nm)、1cm比色皿,以水为参比,测定上述各溶液的吸光度。然后以加入的邻二氮杂菲的体积