文档介绍：纸色谱分离手性化合物
1951年Kotake 以纸色谱分离了谷氨酸和酪氨酸的消旋体;
1952年, Dalgliesh用纸色谱拆分了芳香氨基酸,并且提出了三点接触的理论概念:一对对映体被固定相手性试剂识别,至少要受到对映体和手性试剂3个位点的作用。这些作用是氢键、偶极—偶极、π——π、静电、疏水或空间作用,也称为三点识别模式。
纸色谱载体是纤维素,结构中不对称空腔对于两个对映体具有选择性识别能力。不是单纯的分配技术,而是与对称的纤维素光活性有关。用该理论知道分离氨基酸取得极大成功。
缺点:展开时间过长。
Contractor改进:将纤维素作薄层,分离DL—色氨酸,展开时间由纸色谱的16小时缩短为1小时。三乙酰纤维素与纤维素有类似的拆分机理。
目前纤维素薄层用与分离肽类及某些对映体药物。
薄层色谱分离氟比洛芬对映体
微晶三乙酰纤维素(microcrystalline cellulose triacetate MCTA)分离药物氟比洛芬。
TCL规格;20cm×20cm (acetyl cellulose AC) (300—10/AC—20和300—10/AC—40)或(MCTA 粒度∠10微米),层厚250微米。
粘合剂为羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethylcvellulose, CMC)或硅胶60GF254 (粒度15微米)的乙酰化物水溶液。
乙酰纤维素CMC薄层:取CMC1克与水10毫升
搅拌5分钟,再加入手性吸附剂9克和乙醇
35毫升,搅拌5分钟,匀浆后立刻铺板。
乙酰纤维素硅胶60GF254薄层板:硅胶
60GF254 3克与水15毫升,搅拌5分钟,加
入手性吸附剂9克和乙醇35毫升,振摇5分钟铺板。
室温干燥,2—5小时内使用,勿于空气中久置。
流动相:乙醇:水= 40:60;
展开时间:150分钟;
检测:UV254nm;
薄层中有CMC粘合剂时,拆分效能增加。
三乙酰纤维素—硅胶60GF254薄层板展开时间1小时亦有好的效果。
上述条件不能拆分苯氧布洛芬对映体(见右上图)。可能是两者所喊手性中心在分支中位置不同所致—立体效能和疏水作用的重要作用。
卡洛芬(见右下图)对映体的分离:MCTA—硅胶60GF254
流动相:异丙醇:水= 40:60
展开时间6小时
水和异丙醇有反响洗脱作用。
β—环糊精( β—cyclodextrins β—CD)键合相
β—CD是7个α—D—吡喃葡萄糖以1,4—苷键环和而成。
该分子的缓和空腔具有手性识别能力,能以包结的方式
的方式与对映体分子形成非对映体主客复合物,从而
在色谱过程中造成滞留差异,达到分离目的。
Alak首次将β—CD以7个原子的桥键和于
硅胶表面,成功用于分离丹酰、萘取代氨
基酸及二茂铁类化合物。
薄层板的制备:
β—CD是7个α—D—吡喃葡萄糖以1,4—苷键环合而成。
该分子的缓和空腔具有手性识别能力,能以包结的方式
的方式与对映体分子形成非对映体主客复合物,从而
在色谱过程中造成滞留差异,达到分离目的。
Alak首次将β—CD以7个原子的桥键和于
硅胶表面,成功用于分离丹酰(5—二甲氨基—1—
萘磺酰)、萘取代氨基酸及二茂铁类化合物。
薄层板的制备:
取β—%甲醇水溶液
15毫升()匀浆,铺3mm薄板
(5cm 20cm) ,空气晾干,使用时75度活化15min。
流动相:甲醇/三乙基醋酸铵(1:1,PH )
荧光检出。
手性配体交换色谱固定相
该拆分法是利用手性配体与对映异构体之间形成具有不同稳定性铜复合物进行色谱分离。当手性配体为羟基取代脯氨酸衍生物,待拆分对映体为氨基酸时复合物以离子键吸附于硅胶疏水表面。手性配体一般以氨基酸衍生物制成。如将RPC18薄层板用N,N—
二正丙基—L—丙氨酸铜复合物的缓冲溶液处理,制成的手性薄层板成功分离了丹酰氨基酸各对对映体。
以多聚L—丙氨酸酰胺铜复合物的反相手性薄层板成功分离类似氨基酸异构体。
市售手性薄层板: 具有浓缩区的RPC18薄层板,硅胶平均直径5微米,所用手性配体为羟脯氨酸衍生物的铜复合物。浓缩区有孔径很大,比表面很小的惰性二氧化硅组成。惰性二氧化硅无分离作用,样品点于浓缩区展开至两相之间时可以浓缩成很窄的点或带,经高效薄层色谱可以达到有效分离。
丹酰氨基酸对映体分离实例
薄层板制备RPC18 F254TCL板(5cm × 20cm)和RPC18 F25HPTCL (10cm × 10cm),(70/30)溶液中,醋酸调节PH=7,展开后,吹去溶液,。再浸渍于含醋酸铜( m mol/L)和聚合L—苯丙酸酰胺(m mol/L)的水/乙腈(10:90)溶液中至少1小时,取出、