文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
HPV16 E6基因在口腔上皮细胞恶变中调控作用的研究
姓名:袁荣涛
申请学位级别:博士
专业:口腔临床医学(口腔颌面外科)
指导教师:张志愿
20050401
基因在口腔上皮细胞调控作用的研究恶变中,窒上海第二医科大学及上海市科委基金手本课题受国家自然科学基金.
荏先筒樘客卫技縤缩略词表简称英文全称中文全称改良嘌牛垂体提取物限定性角质细胞无商清培养基聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸缓冲液脱氧核糖核酸二硫苏糖醇乙二胺四乙酸:/
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作者签名:二囊乏毖学位⋯樾:衰蕃溶导⋯:日期:≯、些婴刍学位论文独创性声明学位论文使用授权声明阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。日期
基因在口腔上皮细胞恶变中调控作用的研究中文摘要粘膜上皮细胞转化中与细胞周期蛋白和蛋白表达以及端粒酶激基因在上皮细胞转化和恶变中所发挥的调方法①获取唇裂患儿的口腔粘膜,以胶原酶和胰酶消化,用—培养基进行口腔粘膜上皮细胞的体外培养。以逆转录病毒载体。秆〉玫阳性克隆,在—嘌薪刑逋饬ù嘌"谟肞扩增技术检测转染细胞中的基因,对阳性产物进行蛄存在状态,免疫细胞化学染色检测转染细胞中蛋白的表达情况。③用转化上件对检测结果进行图像分析。④用猅椒ǘ钥谇簧掀舌鳞癌细胞的端粒酶活性进行检测,用臣迫砑型臣蒲结果①体外培养时,口腔粘膜上皮细胞贴壁生长,可连续传代,培养天后,细胞生长缓慢,增殖能力下降,逐渐凋亡。对照细胞全部坏死、漂起,转染纳掀は赴纬裳粜钥寺传代培养后,获得转染有的两个上皮纫胞系。体外连续目的通过分析型人乳头状瘤病毒蛋白活的关系,研究控作用,探讨其在上皮细胞癌变中的可能作用机制。H咎逋馀嘌娜丝谇徽衬ど掀は赴璆测定,并用治鼋溆隚中已公布的序列进行比对。用方法检测基因在转染细胞中的方法检测口腔上皮细胞、/永生化上皮细胞、嗔郯┫赴邢赴周期蛋白及蛋白的表达情况,并用软细胞、转化上皮细胞、分析,研究上皮细胞转化中端粒酶活性的变化情况。转染人腔粘膜上皮细胞后,经筛选,阴性谌丝谇皮细胞、/永生化上皮细胞、以海第二医科大学级博。宦畚
觳庀允荆嚎谇簧掀は赴转染上皮细胞逐渐凋上。②┰产物进行琼脂糖凝胶电泳,各阴性对照组无扩增条带,各阳性对照产物条带,将该特异性产物分离、纯化,进行庑颍湫蛄性转染/永生化细胞可见清晰的阳性条带,转染上皮细胞可见特异性阳性条带,证实整合检测转染细嗔装┫赴的表达水平也显著下降,但与转染细胞无显著性差异。口腔的表达,永生化细胞中微量表达,舌鳞癌细胞中表达增高,但低于转化细胞的表达水平升高,永生化上皮细胞和舌鳞癌细胞的表达水平是口腔上皮细胞的倍。在口腔上皮细胞中低表达,转染上皮细胞的表达水平增高,永生化细胞、舌鳞癌细胞传代培养旌螅琀组在鱿掷┰鎏醮H鞠赴瓯究杉的特异性为瑽分析,其与幸压ú嫉腍检测显示,作为阳性对照的赴醮逦跣远哉盏目谇簧掀は赴蚑嗔郯┫赴无特异性条带出现,入宿主基因组。免疫细胞化学染色显示,转染细胞的细胞浆呈棕黄色强阳性染色,阴性对照的正常一卜皮细胞未见细胞浆阳性染色,阳性对照的永生化细胞瞧呈细胞浆棕黄色染色,显示基因整合八细胞基因组后在蛋白水平表达。③的图像分析显示:口腔上皮细胞的表达水平是/永生化上皮细胞和上皮细胞中鞍籽粜裕琀转染上皮细胞中检测不到口腔上皮细胞表达水平。诳谇簧掀は赴斜泶锼降停琀的表达显著增高。④甌未检测到端粒酶活性;转染上皮细胞的端粒酶被激活,┫赴亩肆C富钚晕WH綡术,,序列相同。胞的倍,/永细胞的倍细胞的上海第二医科大学级博【.学位论文
与上皮细胞基因组整合,