文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
hTGF-β1基因辅助组织工程修复腰椎间盘退变实验研究
姓名:李旭
申请学位级别:博士
专业:外科学(骨科)
指导教师:侯筱魁
20050401
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⋯名巧事妒学位论支独创性声明日期:辏::日期:旦苎:苎:么学位论文使用授权声明期:鲢:点:本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在和摘要汇编出版。保密的学成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已§至权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。文中作了明确说明并表示谢意。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查后适用本规定:‘作者签名学位论文作者签名:/
中文摘要骨组织类似,稚间盘局部的低氧张力、贫乏的血供和酸性环境使得发生退变后其自身织工程的种子细胞。,复合透明质酸为支架材料,骨髓来源的间充质干细胞,是多种细胞的前体细胞,在一定的条件下可以向成骨细胞、成软骨细胞和成纤维细胞等定向分化。本研究体外培养扩增羊的骨髓研究背景:椎间盘退变性疾病殉晌3ト巳褐械囊恢址浅3<疾病。椎间盘退变及其相关疾病如下腰痛等可以导致机体长期致残并降低生活质量。传统的瘟拼胧┌ê舐吠怀鲎滴逝陶3に韬饲谐笆芾劢诙稳诤系龋其均可短期内缓解疼痛但并不能够恢复椎间盘正常的生理和力学性能。与关节腔的软的修复能力低下。最近的研究也集中于使用组织工程技术来进行椎闫盘组织的再生。已知目前有许多研究致力于以自体椎间盘细胞及各种生物材料如藻酸盐、琼脂糖、胶原和龋菇ㄗ橹こ袒淖导渑套橹R灿屑俚难芯勘ǖ懒耸褂米蕴宓娜骨细胞和骨髓间充质干细胞作为构建组织工程椎间盘的种子细胞。对于自体椎间盘细胞和软骨细胞而言,其无法通过无刨的途径来获取,而且体外扩增获得足够的细胞数量往往以丧失细胞的正常表型为代价。而由于具有多向分化潜能和多次传代后仍不丧失其分化能力的干细胞特性,本研究中,我们亦选用其作为髓核组成分,从而促进细胞外基质合成,因而被广泛地用来进行软骨类组织病变的修复。本体外构建组织工程化的髓核组织,进行腰椎间盘退变修复的试验研究。据我们所知,:本试验研究分为四部分:第一部分:,构建成功并鉴定后,在赴薪兄刈橄俨《镜睦┰觥B然ぬ荻壤胄姆ń行腺病毒的纯化,并分别以法及。法进行腺病毒载体的滴度测定。第二部分:.腺病毒载体对羊的体外转染及表达相关报道。上海第二医斜大学缀博士研竞宦畚
上海第二医科太学黝翰┦堪可宦畚间充质干细胞,以/.转染后,进行相关蛋白和表达的检测。证实/·转染可以使后者在一定时间内,获得合成和表达目的蛋白约跋赴饣实鞍譨虸徒涸哪芰Γ鴄虸徒涸是软骨和椎间盘等组织内重要的细胞外基质蛋白,其含量对于椎间盘组织的退变与否起到了重要的决定作用。第三部分:羊腰椎间盘退变模型的制备建立一种可靠而容易重复的椎间盘退变模型,是本试验研究的关键之一。目前所使用的椎间盘退变模型的建立方法,包括自发性和诱发性椎问盘运变模型两大类;后者又可分为直接破坏脊柱和椎间盘结构或通过脊柱外方法来诱导椎间盘退变的发生。本研究中以细针穿刺纤维环抽取髓核的方法,诱发了羊的腰椎问盘退变。退变模型经组织学、影像学和透射电镜等以证实。第四部分:./.体外转染羊的自体,对后者进行基因修饰后使其可以表达所需要的目的蛋白,在与复合后作为组织工程化的髓核组织,回植入此前已抽出髓核诱导退变的羊椎间盘内。术后定期进取材进行羊椎闻盘的常规组织学检测,免疫组化分析,基因袭达检测,考觳饧坝跋学检查,以评估回植的组织工程化的髓核组织对于椎间盘退变的延缓或修复作用。,本研究获得了滴度达/.体外转染羊,在一定时间内获得了目的基因—的高表达。而转染后一系列的相关检测也证实,和型胶原