文档介绍：蛋白质含量的测定
掌握蛋白质含量测定的原理和方法
学会标准曲线的绘制
熟练使用分光光度计
实验目的
测定蛋白质含量的方法
测定蛋白质含量的方法较多
基本上都是根据蛋白质的理化性质和生物学活性建立起来的。
实验原理
二、比色法:利用蛋白质与不同试剂的呈色反应,测定蛋白质的含量,如双缩尿法和酚试剂法(lowry’s method)。
三、紫外分光光度法:利用蛋白质对280nm紫外光有最大的吸光度而采用
一、凯氏定氮法: 根据蛋白质的含氮量来测定蛋白质的含量
公式:每g样品中含氮克数× ×100
蛋白质
呈色试剂: 酚试剂
磷钼酸--钨酸的混和酸
半胱氨酸、
酪氨酸、
色氨酸
组氨酸
还原型混和酸
(兰色)
蛋白质肽键
碱性
烯醇化
铜离子在pH10条件下螯合在肽键结构中
从而使电子转移到混和酸的显色剂上,
增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。
蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的含量成正比,利用蛋白质的浓度与呈色的关系,制备标准曲线,来测定样品中的蛋白质含量。
用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液(浓度为50mg%)配成一系列不同浓度的蛋白质溶液。
取七支试管,编号,按下表操作
实验操作
编号
1 2 3 4 5 6 7
蛋白质含量
(μg)
标准液(ml)
生理盐水ml)
试剂A(ml)
50 100 150 200 250 空白

/ (样品)

混匀,置50℃水浴十分钟,冷却至室温
试剂B

室温放置十分钟
试剂C(混匀)

冷却后在波长650nm条件下比色,测定其光密度值。以空白管调零.
50℃水浴10分钟,
标准曲线的绘制
以蛋白质的含量(μg)为横坐标,光密度值(OD)为纵坐标,绘制出蛋白质含量的标准曲线。
根据样品中的OD650, 从蛋白质标准曲线中找到样品中蛋白质的μg数。