实验二、蛋白质含量测定1.ppt

文档介绍：实验二蛋白质含量的测定
指导老师:
一、实验目的
1、掌握福林酚法测定蛋白质含量
2、熟悉722型分光度计使用方法
Folin—酚试剂由两部分组成。
首先试剂甲中的铜离子在碱性条件下与蛋白质结合成铜-蛋白质复合物,并使肽链展开,使其中的酪氨酸等残基充分暴露出来。
试剂乙(磷钼酸—磷钨酸)在碱性环境中极不稳定,易被铜-蛋白质复合物还原生成钼蓝和钨蓝的混合物而呈蓝色,蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比。测定蛋白质含量的范围在25-250μg/ml。
该法的缺点是各种蛋白所含酪氨酸、色氨酸残基的量不同,生色强度也不同,因此需使用同种蛋白作标准。
二、原理
三、试剂及器材
(1)标准蛋白质溶液:取结晶牛血清白蛋白溶于蒸馏水,浓度为250μg/mL。
(2)Folin—酚试剂甲:(A)称取10g碳酸钠,,溶于500ml蒸馏水中。(B)。溶于100ml蒸馏水中。
临用前按(A):(B)=50:1 ,当天使用。
(3)Folin—酚试剂乙:使用前用水稀释为1mol/L的应用液。
(4)样品液:取动物血清、白蛋白溶液等。
(5)722型分光光度计

取6支试管,编号,按表2-1加入试剂。
四、操作
管号
试剂(ml)
0
1
2
3
4
5
6
标准蛋白250μg/ml
0





(样品液)
蒸馏水





0
0
Folin—酚试剂甲







混匀,室温下放置10分钟
Folin—酚试剂乙







蛋白浓度(μg/ml)
OD650
当加入Folin—酚试剂乙时、应边加边摇,迅速混匀(否则会使显色程度减弱),室温放置30min,以0号管为空白对照管,于650nm处比色。记录数据,以标准蛋白含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线。
50 100 150 200 250

于1支洁净干燥的试管中,加入待测样品各1m