文档介绍：上海第二医科大学
博士后学位论文
TGF-β1和HSP47反义核酸抑制瘢痕形成研究
姓名:王佐林
申请学位级别:博士后
专业:口腔临床医学(口腔颌面外科)
指导教师:邱蔚六;张志愿
20041201
中文搪要、免疫组化及免疫印迹等方法,观察细胞中虸型胶原表结果:≥砗螅笫笃し糇橹衎虸型胶原蛋白的表目的:蚑是多功能分子,我们的前期研究证实它们都反义寡核苷酸抑制皮肤瘢痕形成的可行性。方法:用体外处理大鼠成纤维细胞—小时后,应用达的变化。合成蚑匆骞押塑账崽秸正义和反义链分别处理大鼠创伤模型搴怂嶙椤⒎匆搴怂嶙椤⒖瞻锥哉兆椋和蛋白的表达水平,及其对徒涸泶锏挠跋臁=峁捎镁硎荆达都明显升高。未注射反义寡核苷酸的大鼠,在创伤后第旒从蠺酸能够有效的降低大鼠创组织内的、虸型胶原的表达,匆骞押塑账岽韘笫蟠纯天后,与实验组大鼠相是皮肤瘢痕形成的重要影响因子。本研究旨在探讨癟—的印记,免疫印迹等方法检测靶基因隩膍采用煅椤表达水平的升高,一直持续升高到第欤籋和徒涸鞍椎谋达在创伤后第炜J忌撸中酱瓷撕蟮天。匆骞押塑比,的表达明显受到抑制。这种抑制作用一直持续到第欤后开始减弱,在第焓贝纯谧橹课坏腡泶锼娇J忌撸每组只大鼠诖砗蟮天,第旌偷天取标本,用—
结论:虷在瘢痕形成中发挥了重要作用,反义寡核苷酸能够有效的抑制皮肤创口虷的表达,减轻皮肤瘢痕的形关键词:琀,徒涸鞍祝:郏匆骞押塑账崽秸仍与对照组存在显著差异。而匆骞押塑账崮芄挥行У囊种拼纯组织部位的虸型胶原表达的升高,创口区胶原纤维的排列变得有序。成,具有潜在的临床应用价值。
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虷反义核酸探针抑制癜痕形成的研究前言猵随着口腔颌面美容和整形外科的发展,人们对创伤愈合的标准要求越来越高,创伤的无瘢痕愈合是理想的愈合标准。为了治疗和控制创伤或烧伤后的皮肤瘢痕,了解皮肤瘢痕的成分和形成机制是很有必要的。要成分。新生胶原不仅能填充组织缺损,同时亦为表皮细胞迁移提供支素可能就是导致瘢痕形成和挛缩的基础。沉积和纤维化形成。最近有实验研究发现,在胶原基因以及创伤的愈合是一个复杂而有序的过程,主要是局部组织内多种细胞因子、细胞外基质之间错综复杂的网络作用和细胞外胶原纤维的有序沉积;胶原是瘢痕与结缔组织的主要蛋白,是创伤愈合过程不可缺少的重架。目前认为汀型胶原纤维增多以及改建过程中的某些相关因琀畛醣蝗衔J且恢衷诨受到热创伤时诱导表达的细胞因子。其中谀谥墓芮荒诓斡胶原前体早期合成、蛋白质折叠以及三聚体的组装,是胶原前体正常加诱导热休克蛋白的表达,特别是谋泶铮撇馄湓诖瓷擞系恼个过程中起到了重要作用,参与了生物大分子的合成。创⒒肪持胁斡虢涸铣傻骺氐闹匾=樽又唬梢源俳赴饽≈的启动子区域有慕岷衔坏悖撇釺梢缘骺亟涸虷热休克蛋白工、合成和分泌过程中的伴侣分子。有研究者认为创口的微环境可能会转化生长因子琓—
的合成。诮涸铣晒讨写τ贖的上游;因此,通过控制蚑在皮肤刨口中的表达,可能会减轻皮肤的瘢痕形成。在本研究中,我们检测了瘢痕形成过程中訦和徒蚑~能否成为抑制瘢痕形成的作用靶点。原的调控作用,以及蚑—反义寡核苷酸欠对皮肤创口愈合过程中瘢痕形成具有一定的抑制作用,目的在于明确
第一部分匆迥液宋艮┨秸胍种破し艉猎纬的实验研究鲜的瘢痕组织中胶原的更新率很高,任何影响愈合的因素都将导致优势细胞在创伤后即开始增生,并在天后游走到创口血凝块的临时基质素诱导而出现的热休克蛋白质的一种,与胶原能够特异性结合,它是胶创伤的愈合是一个复杂而有序的过程,包括细胞外胶原纤维的有序沉积。肉芽组织内纤维素和徒涸型胶原纤维有序沉积而形成基质,在随后的改建中,徒涸晌V饕@嘈偷慕涸宋〈占优势的徒涸宋T谌碜橹薷吹牡谕冢缙诘男薷醋橹化为瘢痕组织,修复组织内的水分减少,而汀型胶原纤维增多以及改建过程的其它他因素可能就是导致瘢痕形成和挛缩的原因。在新胶原纤维的松解。创伤愈合的早期就有成纤维细胞的出现;创口邻近表皮中的成纤维中,同时分泌富含胶原的一些基质。成纤维细胞游走前的延迟时间似乎很大程度上取决于成纤维细胞从静止期活化所需的时间。是存在于细胞质中,由热休克等因原前体的正常加工、合成和分泌的伴侣分子,并对胶原的合成具有调节作用,是胶原合成所必需的分子。因为在胶原合成过程中,在已知的有
材料和方法:寡核苷酸探针往大多数热休克蛋白作用的靶蛋白不同,囊恢职械鞍姿坪跏墙达增加,而在胎鼠无瘢痕愈合的创口组织中则无泶锏拿飨栽黾印因此,我们提出怯跋炱し赳:坌纬傻闹匾R蜃又弧Mü种合过程中的瘢痕形成具有一定的抑制作用。化学合成匆搴怂崽秸牒驼搴怂崽秸耄倍运屑罨数据库中查找,显示这些核酸探针的序列与其它基因之间基本没有同源关调节因子中,泶锼绞欠浅R资芑肪骋蛩乇浠跋斓摹S胍原家族蛋白。胶原在内质网的空腔中聚集,并最后被细胞分