基因工程的过程.ppt

文档介绍：提取目的基因的方法
基因工程的过程
学习目标:
掌握基因工程的一般过程
提取目的基因的方法
基因工程的一般过程
获取目的基因
制备重组DNA分子
转化受体细胞:将重组DNA分子导入受体细胞


第一步、获取目的基因
方法:
。
将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库
二、从供体细胞的DNA中直接分离基因
三、用PCR技术扩增大量获取目的基因
PCR扩增仪
目的基因与运载体结合-----形成重组DNA
四、逆转录法:
五、化学法人工合成:
根据蛋白质的氨基酸顺序→信使RNA核苷酸顺序→基因DNA的脱氧核苷酸顺序→目的基因
目的基因mRNA→单链DNA →双链DNA(即目的基因)
第二步、形成重组DNA
用同一种限制酶切割目的基因和质粒使之出现相同的粘性末端,,让目的基因的黏性末端与质粒的黏性末端互补配对后,在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子
提取质粒并用限制酶切割
用连接酶将目的基因和质粒连接
将重组DNA导入受体细胞并扩增
第三步、将重组DNA导入受体细胞
基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。如用质粒作运载体,则选大肠杆菌为受体细胞
导入受体细胞常用的方法是借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理。
将目的基因导入受体细胞
将受体细胞进行扩增
筛选含有目的基因的受体细胞
方法:
1、将目的基因导入植物
农杆菌转化法:根据农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移
至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体DNA上,
是目的基因的遗传特性得以稳定,维持和表达。
2、将目的基因导入动物细胞
显微注射技术:将目的基因片段注入受精卵内,
再移植到雌性动物的子宫内,
最终发育成转基因动物。
3、将目的基因导入微生物细胞
氯化钙诱导转化发:
受体细胞(细菌)在氯化钙的作用下,
其细胞壁的通透性增大,将重组质粒
导入受体细胞,目的基因随受体细胞
的繁殖而复制
第四步、筛选含有目的基因的受体细胞
受体细胞是否具运载体特有的“标记基因”所控制的性状
检测依据:
目的基因的表达