文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
内皮抑素干预动脉粥样硬化的研究
姓名:尤蓓
申请学位级别:博士
专业:内科学(心血管病)
指导教师:于金德
20040501
内皮抑素干预动脉粥样硬化的研究中文摘要新生血管壁发育不完全,且多位于斑块易损部位——“斑块肩区”,再加之血管近年来,我国人群冠心病发病率不断升高,且发病年龄多提早。因此迫切需要寻找并实施更有效的预防和治疗手段。冠心病发病机制较为复杂,除公认的①血管壁脂质浸润学说、②血小板聚集增强,凝血因子质和/或量异常而产生高凝状态学说、③平滑肌细胞克隆学说和④血管内皮损伤,炎性应答学说等以外,粥斑块浸润和腊质沉积,其结果对斑块生长速度起到促进作用。已有的研究显示,造成病变血管狭窄,加重心肌缺血。在本研究中,我们选择内皮抑素来抑制异常赢管新生,探讨其对动脉粥样硬化发展及病理性斑块产生的作用。纯化。以蛋白质印迹实验鉴定蛋白难确性。内皮细胞增殖抑制试验〖亮重复法标记畂,纸层析法明确标记物的放化纯度和【背景】样硬化斑块中异常的血管新生现象也日益受到重视。早在年,有报告发现内膜新生血管参与了动脉粥样硬化进展。斑块内微血管的形成有利于炎症细胞对新生过程中基质降解蛋白酶的释放,新生血管极易破裂,引起斑块内出血,使粥样斑块不稳定,导致急性冠脉缺血事件。另外,新生血管还因改变了斑块形态而研究内皮抑素在小鼠体内的药代动力学。制作,运用杆状病毒行内皮抑素摹治疗,探讨其对模型兔动脉粥样硬化的干预作用。【方法】甀诱导下,在大肠杆菌中表达分泌型原核表达载体树脂亲合实验检测蛋白活性。稳定性。内皮细胞增殖抑制试验和细胞亲干κ匝榧觳钚浴2将按痪簿猜龅ゴ巫⑸涞嚼ッ髦中∈筇迥冢诟【目的】⑼ü齆籌比色分析法停產药后,琹和8上海第二医科走学博士学位论走
球放血处死。收集每只小鼠等量血浆,直接测放射计数后分析药代动力学参菇ㄖ刈橄傧喙夭《局柿甴ü姿岣谱H痉ń浜透ㄖ的病毒和不同终浓度丁酸钠感染不问哺乳动物细胞系。通过荧光相差显微镜和流式细胞仪观察检测细胞转导率和报告基因绿色荧光蛋白泶锴狾直接予/∈蠹∪庾⑸洌鄄霨表达持续票阜置谛椭刈楦俗床《〖J笛榧觳饩侍宸ㄗH分椤T炷周后,治疗对照组和治疗组分别予∪庾⑸洹V蠹嗖飧髋Χ锔紊龉δ堋V瘟周后,治疗对照后,分析新生内膜狭窄程度和内膜/中膜面积比值。逋獗泶铮⒊±ィ逋獗4娣浅结合内皮细胞表面受体。:.宄俾。..ā饕Mü鲈数。并分别收集给药后、和的尿、粪样品,直接检测放射计数,分析体内排泄方式。粒沧H镜紿邪爸刈橄傧喙夭《続,并以肝素亲合层析法纯化,斑点杂交法检测病毒滴度。τ肂—。俗床《颈泶锵低持票钢刈楦俗床《綛—圆煌琈度。并将时间和骨骼肌局部炎症反应情况。分泌型重组杆状病毒质粒腍置诘鞍缀妥5的置诘鞍椎恼沸裕谄は赴鲋骋种剖匝榧ǚ置诘白的活性。猦直接予/∈蠹∪庾⑸洌珽法检测血浆ü咧辰岷削亩瞿谀ぐ咽踅⑼枚鲋嘌不P唬婊组和治疗组进行骼动脉血管造影,并取病变血管石蜡包埋切片,弹力膜染色【结果】所诱导的增殖,诱导细胞凋亡。稳定,且不影响谄は赴鲋骋种苹钚裕阅苡胛幢昙莌竞争性血浆浓度一时间曲线符合二室开放模型。消除相半衰期水平。分泌型原核表达载体注射后,狾和上海摹娇浦搜Р┦侩⑼踚
⒉煌橹牟溉槎锵赴辏5悸矢鞑相同。细胞中,重组杆状病毒瓽转导率和泶锴慷人着投∷崮婆ǘ鹊脑龈叨灾撸丁酸钠能使泶锩飨栽銮俊W⑸渚植抗趋募〉血管周围和肌纤维间隙均无明显的炎性细胞浸润。瓸—瘟周后,治疗组动物的病变血管内膜增厚和管腔狭窄程度显著减轻,内膜新生血管明显减少,且未发现肝肾毒性。瓾赴邪啊⒏嗡厍缀喜阄龃炕闹刈锳病毒滴度较低,不适用于我们的体内外研究。谋泶锏天最高,可持续至少臁珻小鼠肌肉注射狦后旒从斜泶颎,持续至少周,且同时注射耙鹊核卦藕烹牡姆置谛椭刈楦俗床《【结论】芤种颇谄は赴鲋常⒂盏计涞蛲觯黄湓谛∈>鲭耲排泄。分泌型重组杆状病毒谀P吞迥诔晒Ρ泶锊⒎泌,对动脉粥样硬化发展产生抑制作用。【关键词】排泄。活性内皮抑索;动脉粥样硬化;血管新生上海譬二医科走学博士学位论定
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