文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
小鼠孤雌胚胎干细胞建系和鉴定
姓名:孙博文
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:金颖
20040501
小鼠孤雌胚胎干细胞建系和鉴定中文摘要特定条件下无疆地自我更薪并能分化成体皮任四一种缨胞,因此它在基础研究领最后,也是最吸引人的是胚胎干细胞将来可能用于细胞治疗取代受损组织,经过基因工程改造的胚胎干细胞在整个生命科学和医学领域也将产生深远的影响。胚途径得到的囊胚中获得;三是从孤雌发育形成的囊胚中获得。第三种途径产生的胚胎干细胞称为孤雌胚胎干细胞。孤雌胚胎干细胞作为一种特殊的胚胎干细胞也导致移植后免疫排斥。而孤雌胚胎干细胞的任换蚴谴亢献也可能存在少量的同源染色体交换虼舜永砺凵辖ù蟠蠼档兔庖吲懦獾目赡苄浴F浯危材料与方法:首先用化学试剂激活小鼠次级卵母细胞进行孤雌发育,将体外三个胚层的细胞。第一个指标的蕤定可通过将孤雌胚胎干细胞进行连续体外传代以及能否在体外自发或诱导分化成三个胚层的细胞来完成。胚胎干细胞是一种从哺乳动物囊胚中获得的全能细胞。胚胎干细胞能在体外域和临床治疗领域都有重要的研究价值。首先。胚胎干细胞可用于研究早期发育过程中发生的细胞和分子事件。其次,胚胎干细胞可用于药物筛选和毒物筛查。胎干细胞有三种来源:一是从正常受精卵形成的囊胚中获得;二是从通过核转移有重要的基础研究和应用价值。首先,由受精卯发育成囊胚后建立的普通胚胎干细胞系由于主要组织相容复合物诓煌鎏逯浯嬖谙灾钜旖ǹ赡已有文献报道哺乳动物孤雌胚胎干细胞具有向三个胚层细胞分化的能力,因此孤雌胚胎千缅胞将来也可以作为缅胞治疗的一个来源。最后,印迹基霞在胚胎于细胞中的表达情况很复杂,孤雌胚胎干细胞可作为一个有力的研究工具对印迹基因的表达和功能做进一步研究。研究目的:建立小鼠孤雌胚胎干细胞系并对其进行全面鉴定。培养获得的囊胚接种到饲养层细胞上进行连续传代培养,获得足够多的细胞后进行冻存和鉴定。胚胎干细胞的鉴定主要有两个指标:一是是否能在体外长期增殖且保持不分化状态;二是是否具有全能性,即能否在体内和体外分化成来源于培养并观察其生长状态,同时对早期和传代较晚的孤雌胚胎干细胞进行未分化分子标志鉴定。第二个指标可以通过鉴定孤雌胚胎干细胞是否能在体内形成畸胎瘤上海第二医科大学级硕士研究生论文
分化为三个胚层来源的细胞。小鼠孤雌胚胎干细胞的核型是,。结果:建立了三个小鼠孤雌胚胎干细胞系。三个系均在体外连续传代次以上且保持未分化状态。小鼠孤雌胚胎干细胞具有与普通小鼠胚胎干细胞相同的形态学特征:都呈鸟巢状生长,细胞核浆比大,有明显的核仁,细胞之间的界限不清。经过鉴定证实小鼠孤雌胚胎干细胞来源于次级卵母细胞,能在体内和体外结论:我们建立的三个小鼠孤雌胚胎干细胞系具有在体外长期增殖且保持不分化的能力,具有多能性。关键词:孤雌生殖胚胎干细胞上海第二医科大学级硕士研究生论文
英文摘要圭塑兰三墨盔堂丝堡±.,...瑃.。。瓽篛;.甈瓼,,瓵瑀..瓼
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刖首胚胎干细胞研究起源于小鼠性腺畸胎瘤的研究,生殖细胞来源的畸胎瘤含有年,淌谟纸⒘巳伺咛ジ上赴担庠谂咛ジ上赴芯坷飞暇哂欣但人类胚胎干细胞研究一直存在伦理问题。人们对人类早期胚胎究竟是定性较低等的生物都可以进行孤雌生殖,例如蚂蚁、蜜蜂、蚜虫等等。显然这种特殊的生殖方式有利于一些生物在缺乏雄性配偶的情况下仍能维持种群的繁衍。但孤大量杂乱排列的体细胞。对畸胎瘤中体细胞来源的研究产生了干细胞的概念,这种干细胞称为胚胎肿瘤细胞=獷赴射竽遗吆竽懿逗咸逍∈螅蚨っ髁薊赴哂蟹只蹦堋S捎贓细胞存在染色体异常,因此它们的分化能力是有限的。有趣的是,如果把小鼠囊胚进行异位移植也能产生畸胎瘤,因此有可能从囊胚中而不是从畸胎瘤中获得具有分化能力的细胞。年,有两个研究小组分别独立建立了小鼠的胚胎干细胞系。小鼠胚胎干细胞具有正常的核型,能分化成体内任何一种细胞,包括生殖细胞。人类睾丸也能自发形成畸胎瘤,从这些畸胎瘤中获得了细胞系。人类细胞在体外也能分化成来自三个胚层的细胞,但人细胞也是非整倍体细胞,因此在分化潜能上存在缺陷。年,淌谟煤锏哪遗呓⒘肆槌だ喽物胚胎干细胞系,这种干细胞是正常二倍体,能分化产生许多种类的细胞。程碑意义。胚胎干细胞一般有三个重要特征:谧糯睬澳遗能在体外长期培养且保持正常核型和未分化状态芊只扇卟阒腥魏我恢窒赴括生殖细胞。胚胎干细胞在研究人类早期胚胎发育、药物毒物筛选、许多难治性疾病的细胞治疗方面存在极大的研究价值。为一个早期的人还是定性为一个简单的生命体存在严重的分歧。此外胚胎干细胞若用于细胞治疗可能存在免疫排斥,这些情况使人们考虑由其它方式建立胚胎干细胞系。胚胎干细胞有三