文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
应用抑制性消减杂交技术研究胃癌差异表达基因
姓名:顾小年
申请学位级别:硕士
专业:外科学(普外)
指导教师:刘炳亚
20040501
应用抑制性消减杂交技术研究胃癌差异表达基因改变。因此分离和鉴别胃癌的差异表达基因是非常必要的。研究基因【目的】胃癌是一种常见的恶性肿瘤。在恶性肿瘤死亡率中占第二位。人体中每个细胞均具有相同的一套基因组。但何种基因表达表达差异的方法很多,本研究的目的是应用抑制性消减杂交技术鉴定胃癌与正常胃组织之问的差异表达基因。【方法】标本来自胃窦部低分化腺癌的病人,术中分别取肿瘤组减中,正常胃组织作为而胃癌组织作为。二级连接入公司克隆,在胃癌组织的消减文库中获得个克隆。挑出所有克隆在痬陌避星嗟腖嘌信嘌埂3樘岽炕邢减克隆的质粒缓笥肂和酶切。通过电泳,在サ那碇荅褐星植煌笮〉南鮟巍S煤煌中文摘要及其表达量决定了细胞的命运。正常细胞恶性转化后基因表达也随之织和远切端正常组织,立即投放入液氮中备用。两标本都经过病理证实。采用试剂提取肿瘤和正常组织的缓笥肣公司的樘醡2捎肅公司的甋进行抑制性消减杂交。在正向消减中,正常胃组织作为胃癌组织作为,而在反向消膒然后转化>涸诒砻娓哺荴—疘陌避星平板上铺板。培养过夜后在正常胃组织的消减文库中获得含上晦第二医科大学颈:宦邸痕
片段的消减克隆进行测序。用绦蚪泻怂嵬葱苑从肿瘤组织的目庵刑粞和τ冒攵的方法研究它们在例胃癌病人的肿瘤组织和正常组织中的文库中得到个克隆,包括,琁琓,。通过这种方法,我们在正常冒组织个差异表达的基因。都是已知功能的基因。我们得到的基因与信号传导,细胞周期调控,免疫抵抗和肿瘤抑制基因等有关,提示着这些基因可能在胃癌的发生中起着重要作用。【关键词】胃癌;基因;抑制性消减杂交;克隆析。验证峁的表达情况。【结果】在正常胃组织的文库中得到龊胁煌迦肫蔚目隆,包括琀,,和取6谖赴┳橹琔,,,琑蚉等。通过分析,我们确认它们并非假阳性克隆。方法检测赴┎∪说闹琢鲎橹胝N缸橹斜泶锊钜臁=峁【结论】综上所述,我们认为且恢帜芄豢焖俚拇踊虮的消减文库中获得霾钜毂泶锘颍谖赴┳橹奈目庵谢竦土海第二医科大学硕士学经论文
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肿瘤的发生发展与多种基因的表达及相互作用相关,而这些基因差异表达基因进行克隆与功能研究是了解各种肿瘤的发生发展过程的重要环节,不但可探究造成两种表型差异的遗传原因,而且对肿瘤或某一种基因表达水平的改变;捎诨蛲槐涠斐苫口捌,基因表达序列分析,菘因调控的研究,免疫调控基因的研究中都取得了较大的进展,特别在肿瘤相关基因克隆的研究中更取得了明显的成绩。而这项技术近年来在我国也得到越来越多的应用。在肺癌,鼻咽癌,结肠癌的研究中都得到了较好的成果。引言的差异表达是决定肿瘤表型多样性的分子基础。对肿瘤与正常组织之间,肿瘤不同病理类型之间,同一病理类型的不同阶段之间特异性及诊断与治疗具有重要意义。基因表达的改变涉及两个方面,即:泶锏幕蛑掷嗟母谋表达产物的改变。目前识别肿瘤相关基因的方法包括差异显示珼俊硇圆钜旆治,表达序列标签的比较,抑制性消减杂交和基因芯片取年仍谝种菩訮的基础上提出了技术。这项技术在各种研究中都得到广泛使用。如在生殖与发育的基琒,,5诙娇拼笱妒垦ヂ畚
双链的肆印"诮油烦ち吹耐獠约余个核苷酸蛄与第一次镄蛄邢嗤荒诓嘈蛄杏氲诙蜳引物序列特异性扩增检测子中特异表达的片段,使特异表达基因的酸鸵欢塘约余个核苷酸槌傻囊欢耸瞧蕉说乃相同。③在接头上含有启动子序列,并含有内切酶识别位点,便于以后该片断亚克隆入载绨┡宰橹的共同表达基因消减后,再通过抑制性由于杂交二级动力学的原因,在第一次杂交时高丰度的表达基因更易退火,造成低丰度表达基因浓度提升到接近前者水平,实验证明可富集达~倍,使得啥缘头岫鹊牟钜毂泶锘蛞材苡行地克隆。用四碱基识别酶酶切:该酶约在处就有一个切点,一分子而来的双链经该酶切后,可产生数个片断,每个片断一般。其优点是增加了有差异表达的基因检出的可能性,可防止长链片断所形成的复杂结构对有效消减杂交的干扰。际踔饕K枷胧墙ḿ觳庾,如胃癌组织颓献得到充分的富集。特别是其归一化蹋椒ǖ脑恚杓铺氐悖篅怯梢怀ち约余个核苷希宜戳礁’端均无磷酸基团,保证了以唯一的方向与片断连接,即接头长链的擞隿鏝琒琒琗上海第二医科大学颀:唬
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