文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
抗Caspase-12核酶对内质网应激介导小鼠肝细胞凋亡的阻抑作
用
姓名:姜山
申请学位级别:硕士
专业:内科学(传染病学)
指导教师:谢青
20040501
抗嗣付阅谥释そ榈夹∈蟾蜗赴凋亡的阻抑作用中文摘要精性肝病,虷感染等肝脏疾病的发病机制均与内质网应激引方法通过计算机软件设计一组抗小鼠竿纷春应用毒胡萝卜素对小鼠原代肝细胞进行诱导,建立内质网氧化应激细应激是一条新的凋亡信号传导途径。非酒精性脂肪肝、胆汁郁积和酒起的损伤有关。鞍酌盖疤约饕4嬖谟谀谥网,内质网损伤可特异性地介导其活化。非内质网应激所致凋亡不会异常,但对内质网氧化应激引起的凋亡有很好的抵抗,表明阻断目的的核酶,通过体外活性鉴定筛选出高活性的核酶,并进一步验证其在细胞水平对酶,将合成的核酶基因克隆于婧吮泶镌靥澹苯玆狿获得的基因片段连接于—靥錞舳酉掠危过同位素标记的体外转录和切割反应,筛选出具有较高活性的核酶。死亡受体活化和线粒体损伤是已证实的两条经典的凋亡信号传导途径,最近的研究证实,内质网引起幕罨一基因敲除小鼠无明显生长发育钚远阅谥释趸そ榈嫉母蜗赴蛲黾跋喙馗卧嗉病具有治疗作用,并具有很好的安全性。设计并合成针对小鼠虮泶锏囊种谱饔眉岸阅谥释趸び盏夹∈笤肝细胞凋亡的影响。圭塑兰三垦登盔堂垫堡堑士研究生学位论文瓻姜山
盟荏蛉榭拼筵级硕士研究生学位论文结论设计的嵌合型核酶可有效地在细胞内下调关键词胞凋亡进行定性和定量检测,选出合适的诱导剂量和诱导畄。将体外筛选出的高效核酶既肱嘌赴圆缓嗣傅目赵靥狢鞫哉眨琑玃及胞凋亡的抑制作用。结果设计的核酶均有良好的体外切割活性,式细摺P∈笤蜗赴蛲鲇盏冀峁允径竞懿匪、基因的表达,并具有明显抗凋亡作用,抑制鞍酌富钚可能是其抑制毒胡萝卜素引起内质网应激介导肝细胞凋亡的主要机胞凋亡模型,通过,旧ǎ魇较赴堑榷愿蜗检测基因表达水平变化,通过旧ǖ鹊蛲鲋副甑墓鄄炱拦繰对肝细小时可引起大部分肝细胞发生凋亡,与未转染核酶对照相比转染及蛋白表达水平显著下调,凋亡发生率明显减少。制之一。提示抗嗣赣杏τ糜诹俅仓瘟颇谥释は喙性肝脏疾病的潜在价值。内质网凋亡嗣富钚约的细胞姜山
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第一部分抗小鼠嗣傅奶逋庵票赣牖钚约引言束其生命的过程,最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体,被其它细胞吞噬,亦称程序化细胞死亡缩、核碎裂、凋亡小体的形成为特征。凋亡受到机体精细的调控,凋号传导途径。最近的研究证实,内质网应激是一条新的凋亡信号传导途径“P矶嗉膊〉姆⒉』贫加肽谥腥镜雀卧嗉膊〉姆⒉』凭肽谥释ひ鸬乃鹕擞泄天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶作用。它专一性地在天冬氨酸的羧基端切断其与另一氨基酸残基的连接对底物进行裂解。通常谙赴谝悦冈男问酱嬖冢⒂细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身程序,结它与细胞坏死在形态、生化及生物学意义上明显不同,它以染色质浓亡过多将导致组织、器官功能的损伤和疾病的发生;凋亡过少又有利于肿痛的形成和生长。死亡受体活化和线粒体损伤是已证实的两条经典的细胞凋亡信网应激引起的细胞凋亡有关,如阿尔茨海默病、帕金森氏病等神经退变性疾病。。,糖尿病,外伤性脑损伤及扑热息痛引起的肾小管损伤”⋯诟卧喾矫嫒绶蔷凭灾靖巍⒌ㄖ艋途凭愿尾。琀和,在细胞凋亡过程中起关键珽猻上海第二医科大学级硕士研究生学位论文姜山
要行使两类功能:①参与凋亡的信号传导,介导细胞凋亡。②参与促凋亡信号传导中址治类:启动喊–一许多研究证实,利用肽类种萍晾匆种艭蛋白酶的活冈约饕4嬖谟谀谥释谥释鹕祟匾性地使其活化,非内质网应激的凋亡途径不引起罨活性与其它应激诱导分子协同使激活,活化的效应懈疃郃聚合酶和多种其它细胞内的底病及血液病治疗的研究”””堋。它通过碱基配对来识别、结合靶而发挥特异性裂解作用。针对凋亡途径中关键杓朴τ玫暮其抑制剂共存,防止因意外激活而对正常细胞造成损伤。炎因子成熟–一,,介导炎症反应。在,,,在信号传导上游发挥作用,参与启动凋亡效应效应喊–一,谛藕糯ǖ枷掠畏⒒幼饔谩活化的效应芴匾焖庖幌盗械鞍椎孜铮榈枷赴蛲觥啊性可阻抑肝细胞凋亡的发生、发展而缓解肝损伤“”内质网应激凋亡途径一个主要的介导因素是化的裂解酶原等效应⑹蛊浠罨物,最终导致细胞凋亡。该过程需要的参与和活化,但其机制不同于线粒体依赖性凋亡途径,訡一募活不依赖一拖赴豤,下游募せ钚枰狢一的活化∞“核酶作为基因治疗的工具,已被广泛用于等病毒性疾上海第二医科大学级硕士研究生学位论文姜山
材料和方法酶可明显抑制相关基因的表达而起到抗细胞凋亡作用口”啊k睦种萍烈话阃币种贫喔鯟蛋白酶,而核