文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
细胞氧化还原状态调控转录因子NF-κB活性影响凋亡敏感性的
机理
姓名:景亚武
申请学位级别:博士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:汤雪明
20040501
细胞氧化还原状态调控转录因子钚影响凋亡敏感性的机理中文摘要药物诱导肿瘤细胞凋亡是临床治疗肿瘤的主要手段,但不同肿瘤细胞对化疗的敏感性不同,研究肿瘤对化疗的敏感性、进而增强肿瘤对化疗的敏感性成为目前广大研究者关注的焦点。大量的研究表明,细胞的氧化状态有利于提高肿瘤细平引起氧化还原状态失衡虺啤把趸故Ш狻是近期进行这一研究的重要手段疫系统疾病,但对其作用机理并不清楚。我们的前期研究证实,它可以通过升高信号转导通路中从细胞膜到细胞核不同水平多种信号转导分子的活性,都可且与细胞的生存和死亡密切相关,可能在大黄素引起的凋亡事件中发挥重要作本研究分为三部分:第一部分:双香豆素联用大黄素通过改变氧化还原状态增强肿瘤细胞对三氧化二砷促凋亡的敏感性方法:用ḿ觳庀赴盍Γ粤魇较赴恰⑼干涞缱酉晕⒕导觳庵琢结果:在数种肿瘤细胞株,联用醌类物质大黄素和醌类还原酶抑制剂双香豆素后,细胞豹矫飨栽龈撸盇Q嫉拇傧赴蛲鲎饔妹飨栽銮俊胞株的化疗敏感性,由于活性氧是影响氧还平衡的主要因素,通过于预活性氧水大黄素是一种天然蒽醌类物质,广泛应用于治疗各种疾病如肿瘤、炎症和免活性氧水平改变细胞正常的氧化还原平衡虺啤把趸蛊胶狻,增强抗肿瘤药物:的促凋亡作用,但这一氧还状态的改变如何参与细胞的生死调控尚未阐明。以受到细胞氧化还原状态的调控,—亲钪匾5难趸乖舾械淖B家蜃樱用。在此我们将通过大黄素升高活性氧,探讨氧化还原状态、—胫琢鱿胞化疗敏感性的关系。目的:通过联用醌类物质大黄素和醌类还原酶抑制剂双香豆素提高细胞的剑教盅趸乖刺胫琢鱿赴蛲雒舾行缘墓叵细胞的胶拖赴蛲雎剩疾煜赴訟。促凋亡作用的敏感性改变。之一。5诙娇拼笱Р┦垦宦畚
谙赴趸乖刺骺氐蛲龉讨械淖饔康谋浠屑觳猓挥妹庖哂ü夥ǘ訬腔泶镏柿:蠓治鱿赴砸┪锎俚蛲雒舾行缘挠跋欤っ鱊狵钚允芟赴趸乖刺骺氐姆肿踊せ钏母龌方诮锌疾欤挥τ锰匾斓嫩匣秸爰结论:细胞氧化还原状态是决定肿瘤细胞对促凋亡信号敏感性的重要因素。第二部分:.せ畹亩喔龌方冢教至S盟愣顾睾痛蠡扑厝绾斡跋霩细胞生死调控过程中—幕钚员浠方法:应用免疫印迹法对罨牒说那榭鼋屑觳猓挥媚旱缬厩ㄒ坡首1浞治ǘ訬狵与慕岷辖屑觳猓煌üH綨狵ü馑孛副ǜ婊蛑柿2⒓觳馄浔泶情况对俳B嫉幕钚越蟹治觯挥米H綨狵种菩匝腔泶镏柿5方法验证—谙赴蛲龇⑸械慕巧ā结果:.;单用或与大黄素或双香豆素联用,不能改变细胞基础水平暮浚ǹ梢砸鹕倭康腘狵罨牒恕ビ靡餘狵异的荧光素酶表达轻度增高,联用大黄素和双香豆素后,荧光素酶表达下降。以盏己螅鲜龈髯橐┪锊荒苊飨愿谋銽引起的蚪到饧癗狵氚蠨的结合及下游基因荧光素酶的表达。转染—⒒哟募せ钪饕7⒒哟偕婵沟蛲龅淖饔茫蠡扑亓用双香豆素造成的氧化应激通过抑制—氚蠨的结合,阻止—俳下游基因的表达,这一调控方式的最终效应是使细胞抗凋亡的力量得到削弱,从而使细胞对:5拇俚蛲雒舾行栽銮俊第三部分:目的:对细胞内氧化还原状态的改变引起钚砸种频幕斫刑教郑从而揭示活性氧轻度升高促进细胞生存和增殖,而剧烈升高则触发细胞死亡这一矛盾现象的本质;并且通过人为突变氧化还原敏感位点,从分子水平阐述大黄素增强肿瘤细胞化疗敏感性的机理。方法:分别应用免疫印迹、免疫荧光、及荧光素酶的表达对不同浓度目的:从—核情况,但却抑制—生存抗凋亡作用。结论:在细胞—大黄素引起的细胞—上海第二医科大学博士学位论文
结果有助于揭示活性氧轻度升高促进细胞生存和增殖,而剧烈升高则触发细胞死测—腔趸乖刺河τ妹庖哂ü獾姆椒ǘ匝窍赴业难趸原状态进行检测;采用基因定点突变的方法阻断—腔趸乖舾位点,并检测大黄素对—せ畹挠跋旌虷赴牡蛲雒舾行浴结果:大黄素抑制盏嫉腘狵氚蠨的结合及报告基因荧光素酶的表达,呈明显的剂量效应关系;高浓度大黄素引起—随大黄素药物剂量的增高,细胞核的氧化程度逐渐增强;基因定点突变阻断—腔趸乖舾形坏愫螅蠡扑囟訲せ畹囊种萍跞酰细胞的凋亡敏感性降低。结论:大黄素主要通过造成细胞核内氧化程度增强,使—茸B家蜃发生对应的氧化修饰,抑制它与慕岷霞按俳B嫉幕钚裕佣瓜赴沟亡的力量削弱,凋亡敏感性增强。总之,本研究通过对氧化还原状态调控—钚缘奶教郑臃肿铀讲述了大黄素通过改变细胞氧化还原状态增强肿瘤细胞化疗敏感性的机理。本研究亡这一矛盾现象的本质,对于深入理解活性氧调控细胞生死和影响肿瘤细胞化疗敏感性的机制具有重要的理论意义。同时,本研究结果提示使用活性氧生成剂、床肿瘤治疗具有实际意义。关键词:氧化还原状态细胞凋亡化疗敏感性核因子腔难趸盏糔狵醌类氧化酶抑制剂和—种萍恋确桨敢源偈鼓鸵┲琢雒舾械目赡苄裕粤上海第二医科大学博士学位