文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
胚胎体外生产技术和转基因体细胞克隆牛的研究
姓名:杨晓煜
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:曾溢滔
20040901
胚胎体外生产技术和转基因体细胞克隆牛的研究的有效方法;同时也为现代生物工程技术,如:细胞核移植、胚胎早期性别控制技术中较为薄弱以及与体细胞克隆密切相关的活体取卵⑻逋獬墒胚胎体外生产效率,与此同时也为后续的体细胞克隆研究奠定理论基础和提供技体细胞克隆的研究不仅具有重要的基础理论意义,而且还具有重要召勺社会现因体细麓克隆牛生产的同时,结合活体取卵技术,扶供核细胞、受体胞质及核移植操作程序等三个角度分析研究影响转基因体细胞克隆效率的若干因素,探讨体学的实验依据。、胚胎体外生产技术的研究拳没疤迦÷鸭际醵头青年旖斯坦奶牛进行每躅一次的连续周取卵。结果显示:个体间穿刺卵泡的总数不完全一致,但各卵泡直径的百分比构成在个体间没有显著差异;个体问回收卵母细胞的总数不完全一致,但回收率相似:卵母细胞形态分级的百分比构成在个体之间没有显著差异;÷鸭术对青年荷斯坦奶牛进行每周一次的长期连续取卵,在一定的条件下,能够达中文详细摘要哺乳动物胚胎体外生产技术不仅是研究发育生物学和相关胚胎工程技术理论和鉴定、转基因等提供丰富的实验材料和基本的技术保证,是实现动物生产工厂化,解决动物胚胎来源的有效途径。奶牛的胚胎体外生产技术由于其特殊的社会效益和商业利益,一直是各国学者研究的重点。本研究将针对奶牛胚胎体外生产和体外培养燃际踅醒芯亢吞教郑徊浇沂鞠喙氐睦砺刍坪吞岣术支持。实意义。体细胞克隆技术与转基因技术的有机结合为转基因动物的研究应用开辟了瓶的途径,也为乳腺生物反应器的产业化带来了新的契机。本研究在进行转基细胞克隆的相关机制,为转基因体细胞克隆效率的提高进行有益的探索和提供科胞ˋ、虲级刑逋馐芫ê吞逋馀嘌蚜崖饰%,囊胚率上海第二医科大学博七学位论文
对活体取卵的青年奶牛的发情周期特征和繁育能力进行研究。在冢情周期令数减少,周期长度出现逐渐延长的趋势.⑶槌潭燃跞续的一周一次取卵对供体牛的发情周期和繁育能力有一定负面影响,但经过一珻:诩浣忻恐芤淮蔚腛操卵泡数和所获得的卵母细胞数飨远嘤贑,致使最终获得卵母细胞的总数两者相似:在质量上,各级卵母细胞的构成及卵裂率和囊胚率两影响较小,是一种较好的长期一周一次取卵方案。此研究为活体取卵技术的进状窝芯縊来源裸卵的体外成熟以及卵丘细胞在体外成熟中的作用机制。实验分四组:自然裸卵组,色泽明亮胞质均匀的裸卵独自成熟培养;共组同组在成熟率及体外发育率上相似,之间无显著差异,说明,两者的成熟发育潜力相同。因此,可以认为丛吹穆懵延幸徊糠挚赡苁怯葾到较为稳定的回收率和获得一定数量和质量的卵母细胞,经体外受精和体外培养后,能够支持胚胎附植,并达到晚期妊娠。.篛结束后的銮槠冢芷诔ざ然净指矗ǚ⑶槌潭热约跞.;钐迦÷呀崾蟮牡谝桓龇⑶槟考唇惺状稳斯な渚渲值腁组,其怀孕率低于对照组,喝÷呀崾蟮牡谌龇⑶槿战惺状稳斯な精配种的椋吃新式细撸攵哉兆槲尴灾钜臁R陨辖峁得鳎撼て诹状翁岢龀て诘囊恢芤淮渭涠先÷逊桨福⑼ǔ5某て诹÷逊桨附斜较。连续方案组作:间断方案组珼琌操作固定在发情周期的第偷发情当日为第,发情周期的后半段不进行僮鳌结果显示:在数量上,┐痰穆雅葑苁仙伲骄客访看嗡┑⑶樘卣魃希珻械哪膛3鱿智槠谘映さ那魇疲且发情表现减弱,而械乃心膛6急硐殖龉媛烧5姆⑶橹芷诤头⑶特征;在繁育能力上,榈钠骄渲执问灾儆贑椤Q芯勘砻鳎恍杞仙俚拇┐蹋湍芑竦檬亢椭柿肯嗟钡穆涯赶赴叶怨┞雅5一步推广应用奠定了新的理论基础。成熟组,自然裸卵与堵亚鹇涯赶赴春咸渤墒欤换裸卵组,级去除卵丘后再进行独自成熟培养;非裸卵组,正常级成熟~螅コ亚鹪俳刑逋馐芫胩逋馀嘌段时间的修复后,能基本消除。上海第二医科大学博宦畚
动子的蚻基因的颗粒细胞与未转染的颗粒细胞为供核细胞进行体细级卵机械剥脱形成的,具有较高的体外发育潜力。组的成熟率显著高于其怨才嘌平醒芯俊J芫言谝韵滤淖榻信嘌鹤,不进行共培养;异;但囊胚率以全程共培养的组罡撸次之,而另两组则较低,与组和组钜煜灾K得鞴才嘌逑堤岣咛逋饽遗叻⒂实摹白饔玫恪痹谟诳朔共培养体系的影响因素。同种不同类型体细胞:颗粒细胞组,受精卵在牛颗粒细胞单层中培养;成纤维细胞组,受精卵在牛成纤维细胞单层中培养。颗粒细胎早期发育而言,以颗粒细胞为单层的共培养体系优于以成纤维细胞为单层的共培养体系。异种同类型体细胞:牛颗粒细胞组,受精卵在牛颗粒细胞单层中培养:小鼠颗粒细胞组,受精卵在小鼠颗粒细胞单层中培养。结果两组在卵裂率和囊胚率上都无显著差异,说明以小鼠颗粒细胞为单层的共培养体系同样适粒细胞单层中培养