文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞
姓名:周晓飞
申请学位级别:博士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:盛慧珍
20050401
英文缩略表上海第二医科大学博士研究生学位论文
作者签名:艘导师繇罐魄学位论文作者签名:阁磅伊学位论文独创性声明学位论文使用授权声明日期:坦生阂期:如希日期:二伊夕。和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题
第糠郑禾逋庥盏寂咛デ赴只8蜗赴诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞摘要上海第二医科大学博士研究生学位论文诱导胚胎于细胞在体外分化为肝细胞,并研究分化的肝细胞在小鼠月P随后,胚胎干细胞被悬浮培养大约欤纬衫嗯咛澹诖似诩洌砑全反式维甲酸到其中的一部分培养细胞中,其他的细胞不添加全反式维组篟皇∪馀嘌胚胎于细胞具有分化成三胚层细胞的潜能。它已被视为治疗多种疾病的一种新兴策略。现阶段,已经有不少实验证明胍胎干细胞确实有向肝细胞分化的中的功能。椒首先,∈笸ジ上赴琗诵在体外培养。—,做畸胎瘤实验。接着,抽提的芯縎赴钠鹪春退囊组篟∪馀嘌每欤鄄旆只南赴⒔赴芙庠赥校蠷抽提。将反转为。随后,采用—投縋,我们分析这些不能力。康传背景。甲酸。形成的类胚体接种到铺有明胶和徒涸呐嘌∩稀J笛楣卜秩椋组篟培养液
射到肝损伤模型的小鼠体内,分析供体细胞在宿主体内的嵌合情况。通过从肝检测出三胚层的组织。这证明了足胚胎干细胞。捎锰匾煨砸锓治鯨—蚝鸵糯ū尘埃颐欠⑾謘蠷∈蠼邮芰颂逋夥只十天的肝细胞移植后,能够形成畸胎瘤。表明在胚胎干细胞来源的肝细胞中还存在一定数量的胚胎干细胞。上海第二医科大学溥士研究生学位论文同时间点册基因表达的情况。将三种不同方案的结果进行比较,了解诱导胚胎于细胞分化为肝细胞的动态。更进一步,为了研究来源于胚胎盯细胞的肝细胞的功能,将诱导的细胞注脏中抽提捎枚縋检测雄性特异性片段谋泶锢磁卸稀峁畇咛ジ上赴芄辉诿庖呷毕菪∈筇迥谛纬苫チ觥4踊チ鲋锌梢和乇尘啊ü治鰉谋泶锟梢苑⑾郑匝樽閘,都能够在体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞。全反式维甲酸能够加速肝细胞的成熟,同时缩短了成熟肝细胞表达的时间。单用肌肉培养液培养是诱导胚胎干细胞分化为肝细胞的最佳方案。定量峁允荆邮芨蜗赴浦驳男∈蟾卧嘤蟹浅I俚牡那逗下∮。显示来源于胚胎干细胞的肝细胞不易于移植。更进一步,当崧是一株小鼠胚胎于细胞,它有双遗传背景。在体外,胚胎于细胞能够被三种方案诱导成肝细胞。移植自胚胎干细胞分化的肝细胞,嵌合率很低;由胚胎干细胞分化来源的的细胞移植,仍需注意安全性问题。
第糠郑禾迥谟盏寂咛ジ上赴只8蜗赴上海第二医科大学博士研究生学位论文胚胎干细胞系培养在小鼠胚胎成纤维细胞组成的滋养层上。为了体外将培养了和斓南赴悠矫笊瞎蜗拢庾霸诶┥⒑—小鼠体内。在移植后的天时,处死小鼠,取出扩散盒,将其巾的细胞溶解在巾,抽提峁朐谔逋馀嘌诟蜗赴嘌褐械南赴冉希在体我们首次采用扩散盒在体内将胚胎干细胞诱导成了肝细胞,证明体外与体有很多报道显示,胚胎干细胞能够在体外被诱导成为肝细胞。本研究拟在体内诱导胚胎干细胞分化为肝细胞。椒分化,将胚胎干细胞培养成类胚体,在第焓保ɡ嗯咛褰又值狡逃忻鹘旱细胞培养皿上,在诱导液中培养。在天时,将类胚体及来源于类胚体的细胞用ヒ让赶占南赴航又值狡逃写笫笪步原的平皿上,加肝细胞培养液培养。,进行基因表达分析。内诱导后表达更丰富的基因,如琀/。不同小鼠个体之洲的基因表达谱有差异。在不同小鼠个体中培养的细胞表达潜有差异。内环境相结合更有利于将胚胎干细胞诱导成为特定的细胞类型。康縋显示,在体内培养的细胞比赴泶锔嗟崧,蚑。
第糠郑盒∈蟾卧嘞赴浦材P化碳注射。分别在接受注别后的,,和天处死学染色检测肝细胞增殖情况。周围区坏死:处理组和未处理组之间没有明显的差别。甂庖咦橹Х治鱿允荆笫蠼邮芄齬砗螅粜愿蜗不能抑制小鼠肝细胞增殖,因而不适合用于小鼠肝细胞移植的研上海第二医科大学博士研究生学位论文已知用倒千里光碱预先处理大鼠后,有利于肝细胞的移植。为了建立小鼠的肝细胞移植模型,有必要研究对小鼠肝细胞的影响。椒小鼠和大鼠分别接受两次注射∈蟮募亮课/