文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
骨髓间充质干细胞移植修复不同类型心肌损伤的实验研究
姓名:徐瑾
申请学位级别:博士
专业:内科学心血管
指导教师:王彬尧
20050401
不同类型心肌损伤的实验研究骨髓间充质干细胞移植修复上海第二医科大学博士研究生学位论文博士研究生:徐瑾专业:心血管内科上海第二医科大学附属仁济医院博士生导师:王彬尧年本研究受上海市自然科学基金资助上海第二医科大学博士学位论文
学位论文作者签名:矿窃主;:’。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或箕指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。导师签名:日期:作者签名5谝灰娇拼笱Р┦垦宦畚
骨髓间充质干细胞移植修复不同类型心肌损伤的实验研究中文摘要干细胞是一类具有高度自我更新和很强分化潜能的细胞,利用其分化为多种细胞的特殊能力,可作为损伤组织的修复以及新组织形成的来源。骨髓间充质干胞,应用其移植替代损伤心肌和疤痕组织的研究正臼益受到关注,为缺血性心肌病及扩张性心肌病等原因的心功能不全提供了一条新的治疗途径。本课题以成年大鼠为研究对象,建立心梗后心衰和阿霉素心肌病一心衰模型,将体外诱导后的通过直接心肌内注射和尾静脉注射两种途径移植,探讨在不同心肌微环境中的分化、趋化性及对心功能的影响。第一部分骨髓间充质干细胞体外分离、诱导、标记与鉴定康腯建立大鼠骨髓间充质干细胞体外培养、纯化、扩增及体外诱导、标记方法,并检测其表型和体外标记率。方法,借助黏附于塑料瓶这一特性进行分离纯化。相差显微镜观察形态变化,免疫组化检测及,鉴定纯化情况。应用一氮杂胞苷体内活性代谢产物煌蜒氮杂胞苷一痙,进行第鶰逋饬酱斡盏迹嗖钕晕⒕倒鄄煨翁浠庖咦化鉴定诱导前后心肌特异性蛋白及表达。应用溴氮胞苷,昙荕幸浦埠笫咀伲每笲タ姑庖咦化测定体外标记率。未ù芽苫竦没敬炕腗琕粜月式咏%,均为阴性。以痗芏冉又郑耆嘌禾ヅQG迮ǘ鹊髡ィァ琈是骨髓中除造血干细胞以外的另一类干细椒╙通过’椒ǔ槿⌒坌訵笫蠊撬杌竦肕峁鸧通过’椒ǹ苫竦媒隙嗟腗碏椒ǎ%细胞融合后进行传代,能建立稳定的体外纯化、扩增方法,并能避免其老化及向不需要的方向分化。原代~天可首次传代,以后熳笥细胞汉5诙娇拼笱Р┦垦宦畚
传代一次,传到浠臼粜晕捶⑾指谋洌猿上宋赴ぁSτ显影响细胞形态及增殖。诱导前后及均阴性,可能与观察期短有关。纯化、扩增方法。体外狢诱导后短期内周募√匾煨缘鞍譊及仍为阴性。细胞标记率高且稳定。第二部分骨髓闯充质千细胞直接心肌内移植改善心梗后心衰的实验研究康腯将骨髓问充质于细胞移植入心梗后心衰大鼠心肌疤痕中,探讨其分化、转归以及对心功能的影响,并进行鲈碌穆怨鄄焖娣谩椒╙通过左冠脉前降支结扎进行心梗造模,术后天心超检测筛选出心梗后心衰大鼠。抽取同基因背景的近交系大鼠骨髓,体外分离纯化出,将经煌蜒氮杂胞苷两次诱导、标记的以羒/埃分阕⑸溆谛墓:斐鱿中乃ゴ笫笮募“毯壑校ü鄄煲浦埠月至月的分化,了解体内微环境对挠盏甲饔眉耙浦蚕赴穆宰9椤M时应用心超对移植前和移植后履诘男墓δ鼙浠茇《鄄欤私庖浦蚕赴峁鸧行左冠脉前降支结扎进行大鼠心梗造模,术后天存活率达%左右,其中心梗后出现心衰大鼠占%。术后天,心梗区域已有明显疤痕形成,眦及旧な涤邢宋橹嬖凇R浦埠缶植啃募〖或毯壑阳性细胞有肌浆球蛋白和连接蛋白表达,说明其向心肌细胞分化,并形成类闰盘结构。另外部分阳性细胞参与疤痕中血管形成,提示在梗死心肌中也可向内皮细胞分化。进一步电镜观察证实心肌疤痕中存在外来移植细胞,内有刚发育的排列不规则的肌丝:有的与心肌细胞形成紧密的连接,类似闰盘结构,但未发现肌小节及R浦埠月,./昙荕幸浦埠笫咀伲涠韵赴び跋煨。逋标记率高%椅榷ā崧踋应用’癋椒芙⒋笫驧逋馕榷ǖ丶蔧骨髓间充质于细胞;煌蜒氮杂胞营;溴氮胞苷存活的可通过核标记的识别。双重免疫组化染色示:部分标记疞,观察一周,不明的长期疗效。上海第一医科人学博士学位论文
..%,肝相比均有显著性改善琺情况继续保持,⒌月崧踋经盏嫉腗浦埠螅淠茉谛墓:笮乃ゴ笫笮募〖疤痕中存活和逐渐向心肌细胞分化,并可改善心梗后心衰大鼠的心功能,且能较长期保持