文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
抗caspase-12 siRNA对内质网应激介导小鼠肝细胞凋亡的阻抑
作用
姓名:刘海防
申请学位级别:硕士
专业:内科学(传染病学)
指导教师:谢青
20050501
学位论文作者签名:径嗄窈醴作者签名;的溃日期:趁垦丛:§学位论文使用授权声明学位论文独创性声明日期:坦￡:兰:≥日期:强受上:。复成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查文中作了明确说明并表示谢意。阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。导师签名
阅谥释そ榈夹∈蟾蜗赴蛲龅淖枰肿饔抗方法用徒涸冈欢焦嗔鞣ǚ掷周雄性/∈笤中文摘要,墙改瓴欧⑾值囊目的观察抗小鼠凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身程序,结束其自身生命的过程,最后细胞脱落或裂解为若干凋亡小体,被其它细胞吞噬,亦称程序化细胞种生物学现象,它由长—个碱基对的双链榈迹ü罨ゲ古涠裕死亡,它包括三条途径,即死亡受体活化、线粒体损伤和内质网应激珽。多种疾病包括乙型肝炎、丙型肝炎、非酒精性脂肪肝、胆汁瘀积以及阿尔茨海默病、糖尿病等均与内质网应激介导的细胞凋亡有关。半胱天冬氨酸蛋白酶.—。目前,扇乓驯还惴河τ糜谔剿骰蚬δ堋⒎肝细胞生长因子雀郊映煞值呐嘌嘌8ㄖ缒匀砑杓撇⒒Ш霾煌坏慵次坏、的ǖ链嘶鹞K磗,通过凝胶电泳观察退火效果。小鼠原代肝细胞培养第四天,包裹转染琽雜体积比为,H九ǘ任、H竞收集细胞,,筛选效率较高的一组⑷范ㄏ乱徊绞笛樗胹浓度。以一定浓度筛选出的H荆⒃诓煌奔涞闶占赴鄄煲种菩Ч胧幕罨干扰治病毒感染以及治疗肿瘤的工具。小干扰抑制效率高,可达%以上,而且没有明显的毒副作用。研究表明,基因敲除的小鼠无明显生长障碍,因此利用扇偶际跻种芻一基因表达从而抑制细胞凋亡是防治多种内质网应激相关性肝脏疾病的理想方法。园谢虻囊种谱饔茫约孕∈笤蜗赴蛲龅挠跋臁代肝细胞,%台盼蓝染色活细胞占%以上,接种密度为×痬挥煤成抗小鼠瑂:5诙娇拼笱肷涎ж畚
结果设计的抗小鼠结论化学合成抗细胞做産鄄靤对凋亡细胞。的抑制作用;或做四⑷認的关系。观察韵赴蚬阋种谱饔檬保扔蒙秆〕龅囊蛔楦咝亡,同时设置单纯诱导凋亡组和正常细胞组做对照,后收集标本,提取细胞总鯮狿;提取细胞蛋白质以及检测细胞活力时,由于蛋白质半衰期较ぃ鞍字时浠秃笥赗浠虼宋A耸褂盏嫉蛲鍪眕笤儆盏嫉蛲觯柚枚哉眨后收集抑制作用。不同位点Ч煌瑂浓度为保瑂抑制率分别为.%、.%、.%,无明显差别。不同浓度Ч煌喝閟的抑制率均随浓度的增高而增高,以时达到了.%,两者相比琾.∞;不同时问种坡什缘蛲鱿赴检测细胞活力,单用诱导凋亡,笙赴盍τ胝O赴啾燃醯土.%;转染后再诱导凋亡,与单纯诱导凋亡细胞相比活力增高园衜暗鞍酌冈薪虾靡种转染细胞,转染笤儆枚竞躧素琓盏几蜗赴酶原降至一定水平,、,分别称为、、均有明显的无抑制作用,、的抑制率分别为.%和.%,两者相比琾.;但浓度为保瑂为例,浓度为和时无抑制效果,浓度为时抑制率为.%,同,对靶基因种坡饰ァ为.%、%,对蛋白酶原抑制率在、直鹞猼ァァァg胞凋亡早期及一表达均增高,。由于在低浓度和高浓度时均有明显抑制效果,因此认为较稳定且高效。以H鞠赴保缘蛲鱿赴鹀≈抑制率为.%,与凋亡细胞比较.,芦.。蛋白酶原方面,.抑制率为.%,与凋亡细胞比较琾.。比色法5诙娇拼笱妒垦宦畚.%,
关键词谥释ぃ腚滋於彼崦敢∈笤蜗赴作用,能够有效阻抑小鼠原代肝细胞凋亡的发生,有望成为新的治疗内质嘲应激相关疾病的有力工具。海第二医科大学碗士学位论义
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第一部分达的现象,是由于体外转录的形廴玖宋⒘康乃碦所致。当他们将琩ü罨ゲ寡ハ蚴别并降解,导致序列特异的基因沉默。与基因敲除不同,它