文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
细胞内钙超载、细胞骨架与肠上皮细胞损伤防治研究
姓名:贾震易
申请学位级别:硕士
专业:外科学(普外)
指导教师:秦环龙
20050501
邋嘶监』:￡学位论文作者签名:。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均己在成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允讷论文进入学校图书馆被查和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究文中作了明确说明并表示谢意。阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题作者签名导师签名口期
细胞内钙超载、细胞骨架与肠上皮细胞损伤防治研究摘要密封仓内氧气,建立缺氧环境;将正常的培养液换成同体积的无糖含研究背景目前有关肠上皮细胞縀在缺血缺氧损伤后从基底膜上脱落、凋亡以及后续发生赴羌堋⑾赴さ鞍住⑾喙鼗虮泶目的采用体外原代培养胎鼠⑷斯は赴啄ぃD馊毖关系,探索细胞内钙超载引起细胞骨架、细胞膜蛋白、基因表达的改方法ナ驣分离与原代培养:孕取出整个小肠,参照文献建立嘌∨嘌天细胞进行底膜液涂布于培养瓶或培养板,晾干后备用;毖H毖趸肪衬D猓珀米疞设为相应加药组,各组在实验条件下后进行检测:检测指标:赴崖渎剩撼逑刺谙赴⑹占扑阃崖浒俜直龋赴蛲雎剩合谙赴傻ジ鲂。肁疨蛲鍪谱的变化和细胞内钙超载作为始动因素是否确切,利用钙通道阻断剂是否有防治作用尚不清楚。缺氧损伤及采用钙通道阻断剂观察崖洹⒌蛲鲇胂赴诟坪康实验;斯せ啄さ慕ⅲ篒原代培养前,以样品放入特制的密封仓系统,厌氧气体产生剂外袋钙的缓冲液杭唇⒘巳毖;:对照组组氧组组毖W,缺血缺氧组组磺笆龈髯榧游变和钙通道阻断剂的影响。靤笫螅使√ナ螅斯せ种幽诳芍没上海第二医科人学学位论史
细胞利用钙离子探针一疉踉『笥肔觳猓膜蛋白运动并对比分析检测结果。丹明荧光素昙堑亩谷旧ǎ眉す夤簿劢瓜晕⒕观察三种细胞骨架的形态、分布及荧光强度;仆ǖ赖缌鳎憾蕴壁细胞采用膜片钳全细胞记录技术观察;赴诟坪浚憾蕴及构像:消化贴壁细胞成细胞悬液,以患谆砝歹Q前返Q踝杂及膜蛋白旋转相关时间#基因表达:抽提细胞的,逆转录荧光标记,采用大鼠基因表达谱芯片检测各组虮硎銎祝结果赴崖洹⒌蛲觯築、组崖洹⒌蛲鼋螦组明显增可以导致细胞骨架破坏,表现为和—翁有电压依赖性钙电流,该电流可被硝苯地平可逆性阻断,:缺血缺氧损伤导致胞内钙超载,尤以樽钕灾,其次为,;加用剂染色,再用流式细胞仪扑愕蛲鱿赴细胞骨架:对贴壁细胞用与一抗,异硫氰酸荧光素和四甲基异硫氰酸罗基鞅昙牵捎米孕昙且凰炒殴舱窦际检测膜蛋白/..细胞骨架:缺血缺氧分布及荧光强度的改变,樗鹕俗钗Q现兀韵乱来挝狟组,椋加用钙离子阻断剂可显著改善细胞骨架的变;仆ǖ赖缌鳎篒钙通道阻断剂后细胞内钙含量下降,;再先后用加.,;加用钙离子阻断剂后、、组细胞脱落、、疽籥上海第二医科大学学位论文
结论:缺血缺氧损伤后,鱿滞崖洹⒌蛲觯赴羌蹻、关键词钙超载;细胞骨架;肠上皮细胞;缺血缺氧高度比值。/明显增大及膜蛋白旋转相关时间。灾映ぃ珼通道阻断剂后唬痟。和S胁煌潭鹊幕指矗胨鹕俗橄啾扔邢灾錾系鳎籇组表达有差异的基因共觯龌蚍⑸钜毂泶铮鱿碌鳎个上调;榧右┖笥龌蚍⑸钜毂泶铮降低细胞内钙含量,改善细胞骨架的变化,减轻膜蛋白的构像改变,;さ鞍自硕肮瓜瘢核鹕俗槟蛋白构像改变、运动速度减慢,表现为强固定化与弱固定化组分谱线个,其中个下调,个上调;楸泶镉胁钜斓幕蚬个,其中其中个下调,錾系鳎籅组加药后有个基因发生差异表达,鱿碌鳎錾系鳎籧组加药后有和疽籥男翁⒎植技坝ü馇慷染⑸浠纫匀毖H氧联合损伤为重;一些与凋亡相关的基因发生了差异表达;膜蛋白的变化及钙通道的开放可能是引起钙超载的原因;利用钙通道阻断剂可减少细胞脱落、凋亡,调整相关敏感基因的表达,..基因芯片:与对照组相比,组表达有差异的基因共个下调,其中鱿碌鳎的作用。錾系鳌海第二医科大学学位论文
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