文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
黄芪处理前后糖尿病相关基因的差异表达及其功能研究
姓名:吴怡
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:赵涵芳
20050501
作者签名:韭日期:导燧名:越蚜学位敝作者签名:射睦作者签名:丕兰学位论文使用授权声明学位论文独创性声明抽.≯坫日期;≯口中·泊;趂歙如成果。据我所知,除文中已经注明弓玫哪谌萃猓韭畚牟话渌鋈艘丫本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目盼的少量复制并允许论文迸M际楣荼徊阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。日期:
『褪侗鹩胩悄蛉成鐾捶⑷诚喙鼗的代谢疾病,特点是慢性高血糖,伴随因胰岛素置诩埃蜃饔萌毕菀鸬奶恰⒅肪和蛋白质代谢紊乱。该病到晚期易发生致命的肾脏病理变化就是不可逆性肾脏纤维化。导现在已经成为临床上终末期肾功能衰竭的主要病因之一。随着糖尿病的发病率越来越高且发病人群趋于年轻化,越来越多病人受到肾脏纤维化的困扰,研究人员对糖尿病的研究越来越热门,糖尿病及其晚期肾病肾脏纤维化的发生发展机制已是科学研究的热点之一。近几年的研究表明,糖尿病的发生和发展与多个基因的表达异常有关。所以人们力图从基冈角度来研究。糖尿病时哪些基冈表达升高,哪些基冈表达。担对揭示其发病机制有很大的启示。—际跏蔷攀甏鸱⒄蛊鹄吹囊恢旨觳饣员泶差异的方法,该方法可以行之有效的找到差异表达的。但是这种方法存在自身之先天不足,那就是假阳性率过高,大大影响了实验的可靠性。基闽表达谱芯片是目前应用得比较广泛的基因芯片,它快速、硇А⒋蠊婺!⒏咄考捌叫行曰袢∠喙厣镅畔ⅲ丫惴地应用于基因功能研究、药物筛选、疾病诊断和多态性研究等。,建立了差异表达基因谱,并进一步研究了其中有意义的差异表达基因的功能,探索黄芪延缓肾脏纤维化的机理,对研究糖尿病发病的分子机制有很大帮助。为中西医结合治疗提供了新依据。近年来研究基因表达差异逐渐成为热门。从九十年代起,※起了一批研究差异表达基因方法,如差异显示技术,抑制差减杂交技术以及代表性差异分析法等。在这些方法中,发展比较成熟的就是荧光差异显示际狿—际跏窃诜派湫圆钜煜允糖尿病珼是现今危及人类健康的主要杀手之一。是一种多病因致这种不可逆性肾脏纤维化的主要原因就是糖尿病肾病珼上海第二二医科大学硕。芯可弦德畚。
技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法。和其他显示技术相比,狿具有高效、安全、快速等优点。因此我们选择了这种方法,检测黄芪处理前后人的原代肾间方法:培养人的原代肾间质成纤维细胞,第一二代后改用高糖培养基培养,人为模拟糖尿达基因。.峁τ肦蚇橹ぁ结果:.际跸允静钜毂泶锾醮觯齊癗感兴趣的有一个基因:人的起始因子鐾庀宰樱瞿诤印蛑杏卸嘀肿B家蜃咏岷衔坏悖哂泻芮的转录调节功能,实验组中基因表达明显上调,—际跛淙挥衅溆诺悖瞧渥陨碇旅娜钡阋彩遣豢珊鍪拥摹D蔷褪羌俑性率太高。研究人员往往需要花费大量的时间、精力和财力来对实验结果进行验证,否则便不能保证实验的可靠性。就是这个缺点使得很多研究者对—床剑彩沟谜庀罴际醣身的发展比较缓慢。现今发展起来的芯片技术假阳性率高的缺点,使得夫规模,高效率检测差异表达基因成为现实。本研究利用基因芯片技术,筛选糖尿病大鼠与经黄芪处理后糖尿病犬鼠的基因表达筹异,建立了两者之间的基氐表达差异数据库。同时挑选其中的相关基因进一步进行其功能的调商和研究。方法:吞悄虿〈笫竽P停栖胃骨蛔⑸洌悄虿∽橛牖栖巫榇笫笸贝λ馈=剖大鼠。取其肾组织,迅速置于液氮中。抽提肾组织总>碇悄旱缬竟鄄煳藿到狻用虲分别标记糖尿病模型组和黄芪组探针。杂交过夜。观察两者基因表达的差异。选用定量际跹橹せ蛐酒峁结果:黄芪诱导前后糖尿病大鼠基因表达差异显著,共找到差异表达基冈觥F渲质成纤维细胞的基因表达差异。病病人体内环境。随机分为两组,一组为实验组,用黄苠含药血清培养,,蟪樘嵯赴躌,:—蔷攀甏滦似鸬囊恢旨觳饣员泶锴垡斓募际酢8眉际醺咝А踩ā快速,