文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
腺病毒介导的基因治疗中枢神经系统疾病的实验研究
姓名:陈沁
申请学位级别:博士
专业:神经病学
指导教师:陈生弟
20050501
一——学位论文使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是我在导薅的指导下进行的研究工作及取得的研究有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完金了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质舨和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名:导师签名作者签名:日期:日期
腺病毒介导的基因治疗中枢神经系统疾病的实验研究成年哺乳类动物中枢神经系统乃鹕包括脑、脊髓的缺血或外伤神经营养因子,如脑源性神经营养因子,胶质源性神经营养因子治疗神经退行性疾病鏟取得良好的疗效,并可促进损伤后神经的再生、部分功能获得改善。然而,由于考虑到神经营养因子不能通过血脑屏障以及反复多次注射或通过微泵直接用药所出现的问题,。然后建立在延髓水平切断单侧募顾杷鹕硕锬P停⑼ü巧经给予甆孀T说郊顾柙硕窬!=锼仄暇厶前注射于腰髓⋯.表达区,未损伤侧的⒊鲋嵬淮┕邢呓胨鹕瞬嗟闹嵬徊嘀生长数量。结果显示在损伤后芨鐽梢源俳嵬徊嘀ιぃ⑶艺庑轴突可存活鲈隆S氪讼喽缘氖牵谒鹕撕个月给予甆荒苡盏一步明确在中的共作用分子,将为慢性脊髓损伤有效的基因治疗提供基础。中文摘要退行性疾病缗两鹕。琍往往导致永久性的功能障碍。这是由于乏再生或残存的神经组织不具有足够的重新组建环路的能力。大量研究表明应用一较有前景的治疗策略。在本课题的系列实验中,我们研究了腺病毒及辅助相关型腺病毒介导的神经营养因子基因治疗在中枢神经系统再生及退行性疾病中的应用。本课题分为五部分。,成年动物脊髓损伤后几乎不能自愈。为探的作用,@眯翁Ъ觳夥椒ḿ觳庠轴突侧枝生长。这一结果提示湫ノV嵬恢厮芴峁┲
性反应中的一种或多种因子可能与共同作用引起轴突重塑。为确认是应被抑制,镹盏嫉拇┕邢叩闹嵬皇拷仙硌嗡瘟谱槊飨约跎伲第一部分研究发现诱导急性而非慢性脊髓损伤后的轴芽生长,提示急否在其中起作用,我们设计以下二个实验:τ没钒顾抑制急性损伤后的炎性反应,研究的作用。鄄斓痹诩毙员掣窬卸鲜鹾蟆药部位。对于脊髓损伤而言尤为重要,这是因为神经元胞体与它们损伤的轴突通本研究发现在急性脊髓损伤后在腰髓应用可以诱导轴突重塑,在这部分实验中我们研究在感觉运动皮层窬0逯芪Ц弑泶颪果显示在皮层商表达、具有促进轴突重塑的作用。这为探讨有效的中枢神经损伤的治疗方法提供实验基础。第四部分皮质脊髓束损伤后功能障碍的评估在上述实验结果已发现一梢杂盏妓鹕撕笊窬薷矗识枰A私庹庑新生的轴突是否与运动神经元建立功能性突触联系,并有益于功能恢复。首先,大鼠的饕J强刂凭冈硕谡獠糠质笛橹校颐怯τ眯凶咦阌∈炎性反应激活时,促进轴突生长的疗效。应用免疫组织化学技术检测小胶质细胞的增生与活化,以及巨噬细胞的浸润,结果发现当过程中的炎性反这一实验结果提示炎性反应可能是一种共作用因素支持轴突的重塑。第三部分皮层高表达神经营养因子促进脊髓损伤后轴突侧枝生长列于鹕耍枭窬Q蜃又瘟剖北匦肟刂圃谧既返氖奔浯坝肟瘴位点上方能取得成功的治疗效果,其对于神经元存活、轴突生长的作用取决于给常相隔较长距离。是否能够增加轴突芽生。在培养的细胞上检测携带、、基因的腺病毒载体甆.、瓽谋泶铮⒃谠培养的鸡胚胎背根神经元上检测经病毒转染后的细胞分泌的神经营养因子的生物活性。用和际跫觳馍窬Q蜃拥谋泶锪俊J笛榻必须应用一有效的检测手段评估鹕撕蟮墓δ苋笔А验、“平梯步行试验”测试单侧鹕撕笏碌墓δ苷习T谒鹕撕周、海第二医利人学博畚
内碌乃鹕瞬荒茏孕谢指础6杂贑损伤而言,与“行走足印试验”比足之间距离、支持间距。在损伤后鲈拢鳌捌教莶叫惺匝椤辈馐裕蒙阆褚记录大鼠在水平梯上的行走情况,并通过足置位错误评分标准定量分析大鼠行走猤检测基因的表达,用免疫组化方法检测脑内免疫反应。结果发现行转运到黑质区。;蛑瘟圃靥逯瘟粕窬诵