文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
HIF-1α基因促进缺血心肌血管新生的实验研究
姓名:李建勇
申请学位级别:硕士
专业:内科心血管病学
指导教师:王彬尧

/材料与方法鉊治疗缺血性心脏病的实验研究中文摘要\、二、柿V苯有募∧谧⑸涞氖笛:本课题研究了低氧诱导因子贜赴奶逋獗泶镆约霸诨钐逍募∧诒达后的治疗性血管新生作用,探讨其用子治疗缺血性心脏病的可能性。首先构建真核表达质粒,以脂质体为介导,体外转染细胞,经,检测基因在.,蛋白质等方面的表达。表明婧吮泶镏柿D芄挥行г谔逋獗泶锬的基因。进一步建立兔缺血心肌的动物模型,心肌内直接注射基因,通过半定量,免疫组化,毛细血管染色、,局部表达外源基因,有效的促进局部血管新生。该方法可能成为治疗缺血性心脏病一、细臆的体外转染实验氯化钙法制备感受态细菌,;妇琗,及氨苄青霉索筛选阳性克隆。“质粒小量抽提试剂盒进行质粒的小量抽提,限制性内切酶切,琼脂糖电泳鉴定。随后质粒大量抽提试剂盒进行质粒的大量纯化,限制性内切酶酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定,并进行基因序列的测序。榈柿的体外转染,以培养液作阴性对照,三天后取细胞上清,ḿ觳釼泶铮攵縍觳馔庠碒检测外源蛋白质的表达。建立新西兰大白兔心肌缺血模型。取体重ń锏耐茫樽恚潭ǎ钙ぃ荆经胸前正中切口切开,剪开心包,结扎左室支,连续缝合关脾。募∶秆Ъ嗖馓的有效治疗手段之一。的表达,厂上海第二医科大学硕士研究生论文中文摭要
斑讯椭∞欺沙基黟,缺箩肌眵√结论结果二、质粒促进缺血心肌的威管新生示急性心肌梗塞过程。真核表达质粒心肌内注射。在结扎处左上、左下、右下、右上将苡冢簂生理盐水牡阕⑸涞叫募∧冢哉兆樽⑸涞攘可硌嗡H芎蟠λ蓝铮取注射局部心肌进行冰冻切片,皿管碱性磷酸酶染色,枷蠓治鱿低承忻秆9密度检测。冰冻切片免疫组化检测外源蛋白质的表达,组织半定量检测外源一、颍质粒的瞬时表达质粒经过纯化,酶切,电泳,测序后证实为含有目的基因的真核表达质粒。半定量证实在细胞表达外源基因,检测到外源蛋白质表达,匝橹っ鞅泶锏幕虿锞哂猩锘钚浴心电图,心肌酶学指标证实兔急性缺血模型建立成功,半定量簉,免疫组化表明实验组动物局部能够表达外源基因产物,,证实能够有效表达外源基因的白灾剩⒕哂猩锘钚浴P募∧谥苯幼⑸銹柿#募【植磕芄挥行У谋泶锿庠椿虿铮芄淮俳毖P募∽橹难9苄律从而为冠心病的治疗提供新的治疗方法。柿表达。以脂质体介导,新生上海第二医科大学硕士研究生论文中文摘要
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鉊治疗缺血性心脏病的实验研究前言手术蝠,即通过搭桥恢复缺血心肌的血供,但对于冠状动脉广泛弥漫性的病变和冠心病是欧美发达国家发病率最高的疾病,是人类健康的第一杀手。随着生活水平的提高和生活节奏的加快,近几年来其发病率和死亡率在我国呈逐年上升的趋势。目前冠心病已成为我国常见的多发病,严重危害人民的健康,因此采取有效的预防及治疗措施变得越来越重要。目前冠心病的治疗手段包括三个方面:~是药物治疗,如应用芴遄柚图粒钙拮抗剂,硝酸酯类药物及降脂、抗血小板药物等治疗,二是介入治疗从τ经皮冠状动脉血管成形术,冠脉内支架术,冠状动脉斑块切除术靶募〖光打孔术等。可以改善缺血心肌的血供,但是术后再狭窄率高达%。三是冠脉旁路远端血管细小及左室射血分数フ撸灰擞帽痉ㄖ瘟啤啊啊T加%的冠心病患者既不能用膊灰诵蠧瘟疲渚ǖ囊┪镏瘟疲晕薹ㄏ募∪毖V⒆础因此需要寻找新的治疗途径。通过基因治疗使缺血心肌血管新生,已经成为临床研究的重临床实践中经常发现,部分冠心病患者尽管冠状动脉病变严重,甚至于完全闭塞,但临床症状较轻,可无明显心绞痛发作,心功能也相对较好。这些患者的冠状动脉造影常常可见缺血心肌区域出现大量侧枝循环形成。但是这种代偿是不完全的。心脏新生血管形成有三种方式:⑿⊙9苌婕跋赴史纸猓赴ㄒ疲沉增生和官腔形成过程等。⒋笱9苄纬,这是一种胚胎时期形成血管的主要方式。⒉嘀π纬比颂骞诼雎匀毖?沙鱿中律9苄纬桑不过这种机体自身调节的促血管形成通常是不足以代偿,往往需要外源性因子才能促进新生血绲男纬伞9苣谄は赴匾斓乃苛言痛碳ぱ9苄律纳ひ蜃樱谕庵动脉和冠状动脉缺血的动物实验中,无论是注射蛋白质”⋯、裸鲔酢⒅刈橄俨《尽啊[酰腺相关病毒“都能够促进缺血组织血管新生。其他生长因子如現,等的动物实验也取得了类似的结果“。⋯.年月眨拦盍⑽郎芯吭和食品、要课题””。上海第二医科大学硕士研究生论文正文