文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
丙型肝炎病素养体外感染细胞模型建立研究
姓名:徐晓刚
申请学位级别:硕士
专业:内科学(传染病)
指导教师:陆志檬
丙型肝炎病毒体外感染细胞模型建立研究之~。它可引起病毒性肝炎、肝硬化,甚至肝癌,由于目前尚无有效的预防措施和疗效满意的抗病毒药物,在许多国家已成为威胁公众健康的重要原因。预防性疫苗与抗病毒药物的研制与筛选,也因体外感染细胞模型进行了探索。’谂嘌跫嵊跋炫嘌赴訦的易感性以及细胞中病毒生牛血清%⒌厝姿疞⒁鹊核/及硫酸亚铁的维持培养液,置。%趸继跫屡嘌院竺天传代一次,定期收集培养上清、细胞以及细胞爬片。细胞与上清丙型肝炎病毒琀锹愿尾〉闹饕2≡缺乏稳定、高效的逋飧腥鞠赴P投够郝N4耍狙究以一人类肝癌细胞系细胞Q芯慷韵螅徒的复制水平。因此,在参考国外相关研究进展的基础上,调整了培养液的成分及培养温度。实验中,将含%甊阳性血清的接种液与赴,趸继跫﨔共同孵育小时,然后用无血清培养液漂洗,去除残余接种液,再加含新保存于一℃,细胞爬片保存于一℃。最后,应用..及免疫组化法进行病毒核酸与蛋白质的检测。甈法检测发现在接种病毒后第、、天的细胞标本中可检测到甊正链,接种病毒后第、、、、天的细胞标本则可检测到猂副链,ü庖咦榛觳猓中文摘要
体外蕊受述方面得到应用,并发挥一定作用的。分、降低培养温度后,逋飧腥鞠赴P鸵丫ⅲ矗篐疫苗及抗病毒药物的筛选等方面的研究。虽然该模型存在中毒蛋白荒茉诘天检出。这些结果表明在调整培养液成细胞可被腥荆⒅С植《驹谄渲懈粗疲锨逯形醇觳獾甊,提示无丙型肝炎病毒释出。总之,通过调整培养液成分及培养温度,采用猂阳性血清感染赴强尚械摹1狙芯拷⒌腍体外感染细胞模型模拟了腥镜哪承┕蹋纾何健⒋┤搿⑼芽恰⒑怂岣制以及部分蛋白质的表达,因此可应用于礁蜗赴幕啤时间短、病毒滴度低等/足,但是通过合理的实验设计是可以在上【关键词】丙型肝炎病毒感染×细胞模型
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琀恰碦》芮毒,门属该病毒是引起慢性病毒性肝炎的重要病原。在美国,.%的会在年内发展成月干硬化,随后年唑少数感染者会发展成肝衰逋飧腥鞠赴P偷亩P行越细胞ā⒈尾∪烁蜗赴鹒、肝癌细胞系赴鹻引、胞‘引、赴‘“川等;另一类是淋巴细胞系细胞,如:。言内型月十炎病毒黄病毒科丙型肝炎病毒属。基因组全长,由朔潜嗦肭⒔峁骨疦⒎墙峁骨甆’端非编码区’一钩伞慢性肝病是由鸬摹。它可经输血、性接触、母婴、家庭内接触等多种途径在人群,传播,呈世界性分前J澜鏘橹年的统计资料显示,伞球约有一亿七千万腥菊摺W匀皇费芯表明,这些感染者大多会发展成持续感染,而且约有%的感染者竭或肝癌【引。鉴丁二腥镜奈:π裕绾卧し篮椭瘟艸感染日益受到人们关注。但由于除黑猩猩以外尚无实用的动物模型,如能建立~个稳定的体外感染细胞模型或有效的体外培养系统,对于模瑌镅匦浴⒅虏∽髋蟆⒖共《局瘟埔约耙呙缰票傅难芯拷有重要意义。近年来,各国学者就建、了胺貉芯俊3S玫南赴辛嚼啵焕嗍歉卧葱韵赴纾喝颂ジ赴鹒.⑼庵苎5ジ鱿赴尽】、.赴以及甅胞【取U庑┫赴鼙籋感染,并能支持病毒在其中短期复制。赴茄芯拷隙嗟摹窒赴辏淙桓骷已芯拷峁ⅲ痜鄁可,引
进而优化实验条件,以建立稳定且具有良好重复性的体外感染细胞但均显示杀籋感染。凶此,本研究在总结国内外成功经验基础一海≡馠细胞进行逋飧腥鞠赴P徒⒌难芯浚ü愿髦植煌嘌跫卜实验结果的比较,厂解各种条件对细胞易感性及病毒复制的影响,模嘎狧的基础性研究以及药物、疫苗的筛选提供有效工具。
丙型病毒性肝炎体外感染细胞模型研究琀且鹑死嗦噪尽2〉闹细胞模彬和动物模,弘使得对该病毒的各项研究受到制约。鉴于动物ぶ挥欣丛聪∩俚暮谛尚啥訦易感,体外感染细胞模型的研究口益受到重视。现已发现有多种细胞可被腥荆⒅С植《驹细胞内短期复制。此外,还发现不同的培养条件嘌撼煞帧⑴嘌温度等韵赴囊赘行约安《镜母粗埔不嵩斐捎跋臁一’妗薄本研究借豁国内外成功经验,通过调整培养液成分及培养温度,甊川性血清感染体外培养的人肿癌细胞株莎』,口VС諬短期复制的体外感染细胞模型。材料与方法赴喝烁伟┫赴怠S缮虾J心诜置谘芯克罂〔一要试剂:⑿律澹汉贾菟募究希嵛锕こ滩牧嫌邢薰静贰⒁鹊核兀盒熘萃虬锷锘е埔┏⒘蛩嵫铺孩朊渴约痢『向犁月十炎病毒要炳坞S蒧丁谌颂迥诟粗扑畉产极低,且缺乏理想的体外感染心片被感染细胞,榆测剑甊正副链及乖,建‘、材料,惠赠。培养基:荚囤静浩贰⒌厝姿桑簘P乓暌┏
起觚蠺引物:参考ǖ赖姆中鸵铮刹┭巧锕こタ寺】固:中国预防科学院病毒研究所詹荚云教授提供。免疫组【化检测试剂盒:公司产品—粜愿浊澹喝鸾鹨皆毫俅膊《狙芯渴医鸶⒗鲜⒍趸寂嘌洌篐公司产品杭晕公刮产品。抽