文档介绍：水体中隐孢子虫和甲第鞭毛虫的检测方法介绍
来源:中法水务
    隐孢子虫(Cryptosporidium)和甲第鞭毛虫(Giardia)是两种致病性原生动物,可引起人感染患病,分别称为隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)和甲第鞭毛虫病(Giardiasis),其临床主要表现为急性腹泻或霍乱样水泻,可能伴随腹痛、恶心和呕吐等。该病目前尚无安全有效的治疗措施、免疫能力正常的患者一般能在1周至1个月内自行痊愈;但免疫能力缺陷者和儿童感染该病可能因长期腹泻而导致营养不良、脱水、甚至危及生命。
近年来的调查研究表明:水和食物污染是隐孢子虫和甲第鞭毛虫的重要传播途径。据不完全统计,自1976年伯温隐孢子虫()被确认为人的病原体以来,美国、英国、加拿大、澳大利亚等许多国家相继都报道了水源性隐孢子虫病和甲第鞭毛病的爆发流行。其中,1993年3至4月份、,导致了40万人受感染。我国自1986年开始有隐孢子虫病的报道,相关调研表明我国隐孢子虫和甲第鞭毛虫分布也比较广泛。
近二十年未,隐孢子虫和甲第鞭毛虫的危害引起了国际社会的广泛关注,国环保局(EPA)与有关国家相关部门和科研机构对隐孢子虫和甲第鞭毛虫的检测方法,水处理工艺和消毒对其去除和灭活,以及如何防止其污染等开展了系统研究。本文就隐孢子虫和甲第鞭毛虫的检测方法及其活力和感染性的评估两方面作一简要综述。
1、ICR、1622和1623等EPA检测方法
、ICR方法(Information Collection Rule)
该方法用孔径为1μm的纤维缠绕式滤筒过滤来浓缩大量水样,被截留的颗粒物从滤筒中洗脱后,通过离心的方法浓缩,然后利用蔗糖密度梯度离心的方法将生物颗粒与非生物颗粒分开,再用单克隆免疫荧光抗体未标记隐孢子虫和甲第鞭毛虫,以增加其在荧光显微镜检中的检出率。
本方法的缺陷是洗脱、浓缩和纯化等步骤容易造成隐孢子虫卵事囊(oocyst)和甲第鞭毛虫包囊(cyst)的损失,从而导致回收率低;镜检依赖于分析人员的经验和专业背景知识,主观性较大;另外,本方法不能确定卵囊的活力和感染性等等。
. 1622和1623检测方法
为克服ICR方法回收率低等的不足,美国环保局1996年开始采用免疫磁力分离(IMS ic Separation)等新技术对隐孢子虫进行分析监测,提出了单独检测隐孢子虫的1622方法,并于1999年1月将其作为一个正式的检测标准发布。由于甲第鞭毛虫免疫磁力分离系统的建立落后于隐孢子虫,于1998年10月才被认可,因此,EPA于1999年2月才发布能同时检测隐孢子虫和甲第鞭毛虫的检测方法,为将其与1622方法相区别,称其为1623方法。
1623方法采用滤筒过滤,免疫磁珠分离和免疫荧光(IFAImmunof luorescent Assay)显微镜检来检测和计数隐孢子虫和甲第鞭毛虫,并借助DAPI染色和微分干涉( Differential Interference Contrast)显微镜检观察其内部的特征结构来证实卵囊和包囊的存在。以下从过滤、洗脱、离心浓缩、IMS分离纯化、荧光染色、荧光