文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
导入端粒酶延长正常口腔粘膜角化细胞寿命研究
姓名:周海文
申请学位级别:博士
专业:口腔临床医学(口腔内科学)
指导教师:周曾同

英文缩略语表上皮细胞生长因子口腔粘膜角化细胞杜氏改良依格培养液角化细胞培养液磷酸盐缓冲液疏三羟甲基氨基甲烷缓冲生理盐水人端粒嘲孀B济二氨基联苯胺标记抗量;链菌素生物:绿色荧光蛋白角蛋白乙二胺四乙酸转铁蛋白疭/疭上海第二医科大学博士学位论文导入端粒酶延长正常口腔粘膜角化细胞寿命研究英文缩略语衰周海文
中文摘要胞的条件下可成功地进行人正常口腔粘膜角化细胞连续传代培养,细胞可传常口腔粘膜角化细胞延长细胞寿命,为口腔粘膜癌前病变的细胞模型研究奠定基础。并检测端粒酶活性;通过细胞生物学一般性状:包括细胞形态、生长速度和倍增时间及染色体倍时;接种密度为鱿赴痗砰时,培养细胞克隆形成率为%;原代及传代细目的:建立一个稳定的人正常口腔粘膜角化细胞体外培养体系;将端粒酶导入人正方法:比较传统组织块培养、改良组织块培养、酶消化培养法,从中建立稳定的人正常口腔粘膜角化细胞体外培养体系;通过细胞形态学、超微结构观察及角蛋白免疫组化染色等对细胞进行定性研究;通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生长基本规律及其增殖能力;经流式细胞仪检测细胞染色体倍性;通过亚克隆方法构建重组猦柿T靥澹缬炯安庑蚣ǎH细胞后荧光观察,—检测外源性端粒酶表达了解新构质粒能否在真核细胞中表达;采用脂质体介导猦H綩,优化转染体系,激光共聚焦显微镜观察转染结果:采用猼刈槟孀B疾《咀H綩,—觳馔庠葱远肆C福性、肴樘擒彰溉旧赴ダ涎芯俊⑷砬碇嘌⒙闶蠼又种铝鍪匝楸冉献H厩后细胞生物学性状。结果:采用讣耙鹊鞍酌赶ǎ梦扪G褰腔赴嘌海谖细存活一天;培养细胞具有上皮细胞的典型形态,细胞呈多角形,具有丰富的桥粒及大量张力丝等特征性超微结构,角蛋白染色阳性;细胞接种后第卜煳>仓生长期,第齑τ诙允て冢旌蠼肫教ㄆ冢对鍪奔湮胞均为二倍体细胞;重组柿T靥寰缬炯安庑虮榷孕蛄姓罚蛔H赴笥ü庀晕⒕导凹す夤簿劢瓜晕⒕倒鄄炜杉躺ü庠谙赴酥斜泶铮—獾酵庠葱远肆C副泶铮褐侍褰榈紁—转染⑾郑与质粒淖罴驯壤:斗憾穏籐导入端粒酶延长正常口腔粘膜角化细施寿命研究上海第二医科火学博士学位论文刷海文
单独转染;其转ズ.%。绿色荧光在转染Π酥斜泶铮琑獾酵庠性端粒酶,脂质体转染膆粜韵赴谏秆∨嘌周后,阳性细胞逐渐减少:重组逆转录病毒转染H鞠赴肆C富钚约觳庋粜裕琱粜韵胞寿命较未转染细胞延长叮~代。阳性细胞的生物学一般性状及染晒⒘艘桓鑫榷ǖ娜苏?谇徽衬そ腔赴逋馀嘌逑怠H緃赴倜映ぃ衔醋H鞠赴映倍,可达籰晕终狙芯慷钥谇徽衬ぐ┍溲芯康南赴P徒⒕哂兄匾R庖澹韵赴ダ涎芯俊组织工程化人口腔粘膜种子细胞研究及其它粘膜疾病的细胞培养研究具有重要关键词细胞培养口腔粘膜角化细胞/上皮细胞端粒端粒酶癌前病变本课题受国家自然科学基金嗪牛及上海市教委科研基金嗪牛手与转铁蛋白共同转染淖H拘拭飨愿哂贚色体倍性与未转染嗤砬碇嘌⒙闶蠼又种铝鍪匝榻峁R跣浴结论:细胞表型及功能,未发生恶性转化。参考价值。基因转染染率分别为/5诙娇拼笱Р┦垦宦畚年导入端粒酶延挺正常口腔粘膜角化细胞寿命研究中文摘簧崩海义
┦垦宦畚年甅..瑃瓹,猼。.—,
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前言在多年研究口腔粘膜癌前病变的过程中,人们常常应用传统的研究模式——动立的二甲基苯并蒽,盏冀鸬厥蠹漳艺衬ぐ装呶>和培养的细胞成为研究口腔粘膜角化细胞结构和行为的理想工具。与动物模型相比,易生长的细胞。虽然近年来,国内外相继开展了口腔粘膜细胞体外培养的研究,件难以控制等限制,而且由于动物与人的种属差异,使试验结果难以直接应用于人本世纪七十年代,成功地在体外培养了人口腔粘膜角化细胞,使分离细胞培养体系易于控制周围的环境条件,避免了整体实验中神经体液的综合调控因,即需复杂营养的,在一般合成培养基中不细胞生长与成纤维细胞及其分泌产物密切相关。虶首先使用,使大量培养角化细胞成为可能。然而众所周知,口腔恶性肿瘤是临床治疗中非常棘手的问题,五年治愈率仅为%左右,其主要原因之一在于癌症治疗目前仍是一种“癌后治疗”模式。癌前病变是一个从正常组织演变为癌的渐变过程,如何把癌变过程阻断在癌前阶段,从而达到预防恶性肿瘤发生的目的,一直是国内外学者关注的问题。深入研究癌前病变对预防、阻断和逆转细胞癌变的发生具有特殊的意义和广阔的前景。物模型为主。例如,长期以来国内外有关白斑的实验模型是以年状谓典的研究模型。然而动物模型毕竟存在着实验周期长、费用高、重复性差及实