文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
蛋白磷酸酶2A与糖尿病肾病发病机制的初步研究
姓名:王霞娟
申请学位级别:硕士
专业:内科学内分泌及代谢病
指导教师:陈名道
20040401
蛋白磷酸酶与糖尿病肾病发病机制的初步研究摘要关键字糖尿病霾⒉』糖尿病肾病珼是糖尿病最严重和最常见的慢性微せ钛Э觥⑾赴蜃友导吧瞿趈綥流动力学说等等。但是,糖尿病导致肾脏损伤的确切的分子机制目前尚未完全明了。本研究在猕猴糖尿病模型中,应用微阵列杂交技术筛选糖尿病肾病时病的发病可能与这些差异表达的基因相关。糖尿病肾病时下调表达最显著的蛋白本课题应用及免疫组化技术均证实糖尿病肾病肾组织中蛳降,高糖培养的肾小球系膜细胞和成纤维细胞虻谋泶锛癙幕性均下降,提示糖尿病肾病肾组织中的下降可能与高』篖糖有关。尿病肾病肾脏组织中母弑泶锟赡苡隤南碌饔泄亍基因表达谱,微阵列,蛋白磷酸酶血管并发症之一。随着人们生活水平的提高及人口老龄化,糖尿病的发病率在全球范冈内逐年增多,因此的发病率也在不断增加。糖尿病肾病的发病机制涉及多种途径,包括:非酶糖化终未产物学说、反应性氧簇学说、醛糖还原酶学况、差异表达基因,初步观察到,与细胞周期、信号传导、蛋白合成、基因转录调控及糖、脂、能量代谢有关的基因在已知功能基因中占了绝大部分,提示糖尿病肾磷酸酶切碌倍撬浚瞻彼岬鞍琢酸酶家族成员之一。其主要作用是负调控细胞周期,并可能与胰岛素抵抗有关。负调节泶铮珽促进细胞增殖。本研究初步结果显示糖尿病肾病肾组织中弑泶铮咛谴淼纳鲂∏蛳的は赴统上宋赴鸈增加,抑制剂奥克代酸,谋泶铮崾咎以上的结果表明,高血糖抑制的表达,进而诱导母弑泶锟赡苡糖尿病予病的病理生理过程有关。,细胞周期,奥克代酸细胞外调节蛋白激酶ê铮基海镣二医科人学顾貉宦畚
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一——:堂竺丝奎珼是糖尿病最严重和最常见的慢性微血管并发症之一。随着人们生活水平的提高及人老龄化,糖尿病的发病率在全球范围内逐年增多,据统计全球约有亿糖尿病患者,我国约有万糖尿病患者,因此,也在不断增加。在秃型糖尿病,持续的高血糖诱导进展性、不可逆的肾小球硬化,肾小管萎缩及问质纤维化发生,并最终导致终末期%的吞悄虿』颊呋岷喜绕湓谔悄虿〔〕檀晔保浞⒉率最高,%的吞悄虿∷烙谏龉δ芩ソ摺6型糖尿病患者,的发病率虽较吞悄虿』颊呶5停灿サ幕颊呋岱⒄沟接辛俅脖硐值纳霾。而因为吞悄虿』颊叩娜耸诙啵宜孀拍炅湓龀ぜ安〕萄映ぃ浞⑸鶧的危险性也随之增加,一般起病年后蛋白尿的累计发生率可达~%。型糖尿病中由于常与大血管病变共存,其精确的发病率很难确定。据美国糖的发病机制及治疗一直是研究的热点之一。糖尿病肾病的发病机制涉及多种途径,包括:非酶糖化终术产物及反应性氧化产物增加、、细胞因子参与及肾内血流动力学增加等。但是,糖尿病导致肾脏损伤的确切的分子机制目前仍末完全明了“哺乳动物组织的表达,处于~种生理性生长和病理性改变的动态平衡状态。在某一疾病的特定过程,不同的基因可表现为上调或下调。这些基因不仅可成为该疾病的易感/抵抗的候选基因,而且可能对相关疾病的发病机制提供新的研究思路。在此基础上,针对潜在的药理或分子靶的特异性治疗策略的选用可能能为疾病的根治提供线索。微阵列杂交技术等分子生物学的新兴技术『欠⑾中禄蚝驮诜肿水平上研究基因表达谱的有力武器,它是~种对特定组织的基因表达进行大规模和高通量研究的方法。是获取特定情况下某一组织基因表达谱详尽信息的有效手引言糖尿病肾病珽。典型的多见于吞悄虿。负尿病协会统计,糖尿病已成为欧美等国家致的最主要病因。正因如此,肾病
段。它通过把数量巨大的靶基因或寡核苷酸片段有序地,高密度地固定在载体上,将待测样品用荧光或同位素标志,制备成探针与芯片杂交。杂交信号用扫描仪检测,计算机分析结果,获得类似于点杂交的分子杂交数据,从而可以比较各组织靶基因表达谱的差异。本课题应用票糕ê锾悄虿∧P停胏⒄罅屑际跎秆√悄虿∩病。肾脏组织差异表达基因,并探讨和研究差异表达基因在病理过程中的作用。海第二医科人学硕,貉宦畚
材料与方法臀赂咚倮胄幕灼脸上褚三、研究方法组织来源健康成年雄性猕猴唬婊殖闪阶椋直鹞L悄虿∩霾∽榧正常对照组。用链脲佐霉素痥猜鲎⑸渲票父哐L呛锬P停L且取猴上肢浅表静脉进行血糖监测。血糖疞即认为高血糖模型制备成功。其后一直给以普通饮食饲养,期问每月监测血糖次,留尿化验尿微量白蛋白一次,至出现尿蛋白阳性两次后处死,即为糖尿病肾病模型±碇な礑。分别取肾组织,抽提⒕孀B己螅本一致替糖尿病肾病与『J北泶镉胁钜煅以两者表达量比值兰I调,.O碌。以半定量—な礳