银杏叶提取物对胶质瘤细胞NFκB表达和NO生成.doc

文档介绍：银杏叶提取物对胶质瘤细胞NFκB表达和NO生成
【摘要】目的研究银杏叶提取物(EGb761)对C6胶质瘤细胞核转录因子κB(NFκB)表达和可诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)生成的影响。方法以脂多糖(LPS)和佛波酯(PMA)诱导体外培养的C6胶质瘤细胞表达可诱导型一氧化氮合酶、产生大量NO,应用激光共聚焦成像系统和NO荧光探针监测细胞内NO浓度变化,逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对C6胶质瘤细胞中iNOS基因表达的影响,并探讨这一调控作用的分子机制。结果 EGb761能明显降低C6胶质瘤细胞中iNOS mRNA和蛋白的表达、减少NO的生成,抑制IκBα的降解和阻止p65/RelA进入细胞核。结论 EGb761可通过NFκB信号通路对C6胶质瘤细胞iNOS基因表达和NO的生成进行调控。
【关键词】银杏叶提取物;胶质瘤细胞;可诱导型一氧化氮合酶;一氧化氮;核转录因子κB
Regulatory Effect of Ginkgo Biboba Extract on the Expression of NFκB and Nitroxide Production in Glioma Cells
Key a cell; iNOS; Nitric oxide; NFκB
银杏为最古老的中生代孑遗稀有植物之一,属裸子植物门银杏纲银杏科植物,现仅存一科一属一种,有裸子植物“活化石”之称。银杏树的根、叶、皮及种子均可药用。银杏叶入药始于明代,传统医学用银杏叶治疗哮喘、支气管炎和老年性心血管疾病,但叶中含有氢***酸,可加速心率,副作用大。20世纪60年代后,德、法等欧洲国家先后开展了对银杏叶的研究。1965年,德国威玛舒培博士(Dr. A诱导体外培养的C6细胞为实验模型,采用激光共聚焦、RTPCR、EM培养基、胎牛血清(Hyclone公司); UNIQ10柱式总RNA提取纯化试剂盒(上海生工公司);Access QuickTM RTPCR试剂盒(Promega公司)等;EGb761(法国Beaufour Ipsen 制药公司MarieTherses DroyLefaix博士惠赠)。
实验仪器有:CO2培养箱(Napco,USA);紫外分光光度计(Beckman,USA);电泳仪(EPS 301,USA);PCR仪(Eppendorf,Germany);凝胶成像系统(UVP,USA);激光共聚焦扫描荧光显微镜(Olympus,Japan)等。
细胞培养将复苏的C6胶质瘤细胞混悬于DMEM培养基中(含10%灭活胎牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素),置37℃、含5% CO2的细胞培养箱内培养,待细胞长成单层后(约3d)按1
∶4传代。
%的胰酶消化,用含10%胎牛血清的培养基重悬细胞,配成1×105的细胞悬液,接种于4cm培养皿中,每皿2ml,贴壁2h后换成无血清培养基,分为3组,即对照组、诱导组(LPS 1μg/ml和PMA 400ng/ml)和药物组(在加入LPS和PMA前2h加EGb761 50μg/ml),12h后换成带DAF2DA探针( μmol/L)的培养基,培养1h,用培养基洗涤