文档介绍：
B 31
DB45
广西壮族自治区地方标准
DB 45/T XXXXX—XXXX
慈姑组培苗生产技术规程
Technical specification for arrowhead tissue culture
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XXXX - XX - XX发布
XXXX - XX - XX实施
广西壮族自治区质量技术监督局发布
前言
本标准按照GB/—2009给出的规则起草。
本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。
本标准起草单位:广西农业科学院生物技术研究所。
本标准主要起草人:高美萍、江文、韦绍龙、张驰、何芳练、颜梅新、董伟清、张尚文、蒋慧萍、王艳。
慈姑组培苗生产技术规程
范围
本标准规定了广西慈姑组培苗生产环境的消毒灭菌、培养容器和接种器械的清洗、外植体取材、消毒、接种操作、组培苗继代、生根及炼苗、组培苗质量标准及变异苗控制等的技术规程,同时对培养基配制、消毒灭菌以及生产设施建设和设备配置提出了具体要求。
本标准适用于广西慈姑组培苗的生产技术规程。
术语和定义
慈姑
以地下球茎为商品生产产品的泽泻科慈姑属宿根性水生草本作物。
球茎
由地下匍匐茎的先端膨大而成扁圆的球茎。
顶芽
着生在球茎上部的芽。
外植体
用于接种培养的各种离体的植物材料,如植物各种器官、组织、细胞及原生质体等。本规程规定采用慈姑球茎的顶芽和匍匐茎茎尖作为外植体。
慈姑组培苗瓶苗
采用慈姑球茎的顶芽和匍匐茎茎尖作为外植体,采用植物组织培养技术在培养容器中进行无性繁殖获得具有完整根、茎、叶的慈姑小植株。
植物生长物质
指一些调节植物生长发育的物质,如植物激素和植物生长调节剂。
继代培养
在外植体初次培养的基础上,把所获得的培养物周期性地分株、分割、剪截等转接到新鲜培养基上进行再培养,从而使得以成本增殖的过程,又称增殖培养。
变异
在组培生产过程中受到种源纯度、培养基、培养条件等因素的影响,导致组培材料或生产出的组培苗植株以及移栽到大田生长的植株遗传特性发生明显变化,其形态上如叶色、叶形、球茎大小、形状、植株高矮等也显著表现有别于原品种植株的特征。
生产设备(施)、组织培养场所要求及所需化学试剂
生产设备及设施、组织培养场所要求
建筑设施
组培实验室或组培工厂周围环境必须干燥、洁净,不允许有垃圾或其他污染源,四周通风良好。实验室或组培工厂各部分的配置要合理安排,做到杜绝污染、方便工作,节省能源及使用安全。组培工厂设计包括洗涤室、培养瓶晾干室、药品室、培养基配置室、培养基灭菌室及储存室、更衣室、接种室、培养室、隔离带等。
所需仪器及生产设备
洗涤设备
工厂化生产可选用自动或半自动洗瓶机,实验室或小车间可选用普通洗涤用具,如洗涤水槽、塑料盆、塑料桶、塑料框等,由人工洗涤,并配置有干燥箱、凉瓶架等。
灭菌设备
高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外灯、臭氧发生器、烘干箱、电磁炉等。
接种设备及工具
超净工作台、钢丝架、镊子、解剖刀、剪刀、接种针、铝片、垫板、酒精灯或接种工具消毒器等。
培养设备及组培器具
培养所需的空调、冰箱、除湿机、光照培养箱、光照培养架等,及组培所需的玻璃器皿及器材盛装器,如罐头瓶、三角瓶、专制塑料瓶、烧杯、试剂瓶等;计量器皿(量筒、容量瓶、移液管等)以及pH ~、温湿度表、照度计酸度计等实验室常用器具。
常用化学试剂
常用消毒灭菌剂
选用酒精、高锰酸钾、***化***、次***酸钠、新洁尔灭、来苏水等。
组培苗培养常用试剂
慈姑组培苗生产所用培养基主要为有机物和无机盐类,应符合附录A的要求。
培养容器和接种器具的清洗
培养容器的清洗
浸泡
须先将培养容器中培养基倒掉后放入新洁尔液或洗衣粉溶液中浸泡30 min以上;污染的培养容器应分开浸泡,浸泡时间不少于2 h。
清洗
用瓶刷洗刷瓶内的残留物;用牙刷清洗瓶盖内残留物。
冲洗
用自来水冲洗培养容器2~3遍。
晾干及储存
将冲洗干净的培养容器倒放在培养容器专用框中晾干,后倒立堆放整齐在通风透气处待用。
接种器具的洗刷
清理接种器具(镊子、解剖刀、铝片、垫片等)上残留物,在新洁尔液溶液中浸泡10 min以上,用钢丝球洗刷2~3遍,晾干后用报纸包好,。
消毒灭菌操作
洗涤室的消毒
每天清洗地面,并用来苏水或新洁尔灭等消毒剂喷洒消毒,保持室内清洁。
接种室和培养室的消毒
在接种室内定期采用紫外灯灭菌1 h左右,%~%新洁尔灭对接种室地面、门窗及培养室培养架进行喷雾或擦拭消毒;并定期(一般7 d)用艾叶和苍术混合烟雾熏蒸1 d;每月用杀虫剂、杀螨剂、杀蚁药等药剂喷