文档介绍：GB/T XXXXX—201X
中华人民共和国国家标准
ICS
B 20/39
核糖核酸酶活力测定
Determination of the activity of ribonuclease
(征求意见稿)
发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会
201X-XX-XX 发布
201X-XX-XX实施
前言
本标准按照GB/T —2009给出的规则起草。
本标准由中国标准化研究院提出并归口。
本标准起草单位:。
本标准主要起草人:。
核糖核酸酶活力测定
1 范围
本标准规定了核糖核酸酶活力测定原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析。
本标准适用于生化试剂核糖核酸酶活力测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)
水解核糖核酸(RNA)中磷酸二酯键,生成寡核苷酸或单核苷酸核酸的核酸酶。根据酶作用的位置不同,可进一步分为内切核糖核酸酶与外切核糖核酸酶。
核糖核酸酶活力单位(ribonuclease activity unit)
mg/ ml酵母RNA为底物,在50 ℃且pH ,1分钟内使反应液在260 (U)。
4 原理
核糖核酸酶催化产物在260 nm波长下具有特征吸收峰,通过外标法计算核糖核酸酶的活性。
5 仪器设备及器具
恒温水浴槽。
紫外-可见分光光度计:。
pH计:。
1 cm石英比色皿。
电子天平: g。
6 试剂
本方法所用试剂均为分析纯,除特殊说明外,实验用水均为GB/T 6882规定的二级水。
mol/L 乙酸/乙酸钠(NaAc/HAc)缓冲液,pH
g NaAc溶于水中,,混匀后定容至1000 ml。
酵母核糖核酸
来源于圆酵母(Torula Yeast),含量≥98%。
7 分析步骤
环境要求
所有试验操作步骤应在洁净的无外源RNA酶环境中进行。
试验液的制备
酵母RNA溶液
称取酵母RNA mg溶于水中, mg/mL。
固体样品待测酶液制备
mg样品,溶于水中, mg/mL。
液体样品待测酶液制备
mg/mL。
酶促反应
同一样本取4只离心管,设置空白对照管1只,检测管3只, mL、 mL与NaAc/ mL;检测管中依次加入酵