文档介绍：鲈鱼病毒性疾病病原体的检测与鉴定
淡水鲈鱼具有生长快、适应性广、抗病能力强、肉质鲜美等特点,深受人们欢迎。我国沿海均有分布,资源丰富,虽然,鲈鱼抗病能力较强,自然条件下不易患病。但人工高密度养殖因其生存环境及空间发生很大变化,稍有不慎极易造成疾病,尤其是病毒性疾病,危害极大。
鲈鱼常患的病毒性疾病有:
鲈鱼淋巴囊肿病
鲈鱼病毒性出血性败血症
鲈鱼病毒性脑坏死疾病
鱼类淋巴囊肿病是由淋巴囊肿病毒感染引起鱼类的一种典型的皮肤和浅表组织慢性病,它是最早发现的鱼类病毒性疾病。
该病的普遍症状是病鱼体表长有瘤状物,严重时内脏组织器官也出现病变。
所以以鲈鱼淋巴囊肿病为例设计实验证明这一病毒为这一病害的病原体。
鲈鱼淋巴囊肿病病状:
病鱼眼睛、口腔内外、鳃及上下体表各部位有大小不一的囊肿物,囊肿物小如念珠,大如菜花,颜色有白色、粉红色和黑色,较大的囊肿物上有肉眼可见的红色小血管。患病严重的,囊肿物遍布体表,当囊肿物破裂时,会形成开放性溃面。鲈鱼轻微发病时,摄食正常、但生长缓慢;疾病严重时,病鱼基本不摄食、部分死亡。
检测方法
显微和超微观察
核酸扩增技术
免疫检测
显微和超微观察
显微镜和生物电镜技术是研究病毒感染引起的的病理变化,观察病毒和细胞超微结构,揭示病毒与宿主细胞相互作用的技术。通过电子显微镜可以观察病变细胞的病理结构、病毒形态大小和类型以及了解病毒的感染、复制和形态发生等特征。
检测步骤
收集病体鱼与健康鱼的细胞或组织样品
(主要靶器官鱼体表皮下结缔组织、其次是鳃、体腔膜、肠、脾和头肾)
制备石蜡切片、冷冻切片或半薄切片
经荧光染料染色
观察并与健康鱼同区域细胞做对比
观察到的症状
在体表皮下结缔组织中,当大量成纤维细胞膨大、变圆,大小为10~18μm时,细胞膜外未出现囊壁,少数细胞的细胞质中观察到嗜碱性物质(碱性物质通常是指具有提供电子的能力或接受质子的能力的物质。);18~20μm的膨大细胞在细胞膜外出现囊壁,细胞质内出现嗜碱性物质;大于20μm的细胞具有了淋巴囊肿细胞的典型特征。另外,在鲈鱼的鳃等部位均观察到淋巴囊肿细胞,并在鲈鱼脾内观察到膨大细胞。
显微和超微观察
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