文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
黄芪延缓糖尿病肾病进展与HGF/c-met相关性的实验研究
姓名:牟姗
申请学位级别:博士
专业:内科肾脏病学
指导教师:张庆怡

关。而目前又缺乏阻止和延缓肾小管问质病变或纤维化进展的有效措施拜”黄芪延缓糖尿病肾病进展与痗—相关性的实验研究病因之一。伍年来的研究结果表明,进展过程中肾小管间质病变较肾小\⒒拥淖饔茫蕴剿骰栖窝踊荷鲈嗉膊〗沟幕怼#饕Q实验通过探讨肝细胞生长固予”球病变的意义更加重要。肾间质病变的严重程度与肾脏疾病进展速度密切相首先,本实验进行原代肾间质成纤维细胞培养,以观察高糖环境下肾间质成纤维细胞增殖、细胞周期的变化情况,并对细胞表达狟其次,—泶锊淖饔采用肾肿瘤切除的正常极肾脏进行体外肾间质成纤维细胞的原代培养。并且以肾间质成纤维细胞为研究对象,观察高浓度葡萄糖对细胞产生的影响。另外应用椒ḿ觳庀赴饣食煞諭徒涸姆置凇髓质深部组织剪碎进行培养,得到了较纯的均匀一致的肾间质成纤维细胞,丝分裂受到抑制,并且细胞停滞在F凇4耸庇捎诟咛浅中碳ぃ赴饣质主要成分型胶原的含量显著升高,并在作用小时达到高峰。与此同糖尿病’,对的发病机理提出新的解释,并且为临床上用中药黄芪这一治疗途径,延缓进展提供了新的理论依据。虸型纤溶酶原激活物抑制剂—产生的影响进行分析,为整个实验奠定了基础。讨了痗—⑾赴鲋场—进行检测,为痗—系统激活是机体产生的防御反应这一论点提供依据。最后,采用黄芪含药血清作用成纤维细胞,观测对一、高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞的影晌应用椒ā⒘魇较赴欠直鸲韵赴鲋场⑾赴芷诮胁舛āM辈用方法和细胞免疫组化方法对细胞表达瓸蚉一泄鄄狻结果显示,采用传统的消化培养法,严格分离肾实质和’肾髓质,并将肾为后续实验奠定了基础。高糖作用下,早期细胞周期发生改变,∈焙∈达到高峰。体外高糖作用后细胞发生的反应,:时,细胞中狟一约5诙娇拼笱恫┦垦芯可畚
改变。因此证实,这种体外细胞模型可以模拟体内糖尿病环境。二、高浓度葡萄糖诱导人肾间质成纤维细胞痗—谋泶高峰,随后表达量逐渐降低,并且存在时间依赖性降低。我们的研究结果表明高糖在作用细胞的早期诱导痗—低车谋三、外源愿咛窍律黾渲食上宋赴挠跋期进行测定。采用蛋白质印迹和细胞免疫组化以及等技术观察而从某种角度看出,它改善了细胞肥大的发生,使得处于期细胞数量有所下降。观测结果同时显示芤约亮恳览档男问剑种朴捎诟咛怯盏嫉外对⒒幼饔玫幕斫辛顺醪教教帧=峁允荆琀可以诱导其受采用蛋白质印迹和约癛燃际豕鄄煺6哉兆椤⒏咛亲以及甘露醇组标本中蚦—诘鞍字屎突蛩奖泶铩结果显示,%结果显示泶镌诟咛怯盏荚缙诔鱿郑孀鸥咛浅て谧饔闷浔泶锪肯陆担在作用小时达到最低点。同时应用特异性约梁卸訦分泌进行检测,结果显示,高糖作用早期可以诱导细胞分泌饔∈贝锏另外,采用特异性抗猰抗体进行蛋白质印迹。在觳獾揭条染色条带。不同组别相比得出,高糖作用早期有琺蛋自的表达,并且在小时达到高峰,而对照组并没有此特点。检测结果显示三组都,以D诓握战邪攵糠治霰砻鳎哉兆橄比,高糖组作用早期猰的表达量存在显著差异。此外,与高糖等渗的甘露醇只是在特定作用时间内诱导蚦—谋泶铮事洞加盏级者的表达虽然与对照组存在差异,但是与同时间段内的高糖组相比表达量并达。这种诱导作用并不完全是由于高糖所致的高渗透压因素介导的。高糖培养人肾间质成纤维细胞,早期内源性痗—低郴钚酝毕灾撸得我们关注到痗—贒⒉≈,在这之后肾脏细胞发生肥大。说明痗—低晨赡茉调节的肾脏细胞增殖、肥大反应中起重要作用。应用椒ā⒘魇较赴欠直鸲酝庠醇尤際后细胞增殖、细胞周对高糖作用下细胞表达性胶原、。结果显示,不同剂量的梢源俳赴鲋常欢鳫并没有导致细胞过度增殖,它只是改善了由于高糖而诱发的细胞增殖受到抑制的情况,并没有改变正常细胞的增殖情况。另外,⒚挥屑铀傧赴蚀蠊蹋蚉一虮泶锏纳系鳌O赴庖咦榛峁敝な担琀还可以抑制二者蛋白的表达。此外,訧徒涸铣刹⒚挥胁种谱饔谩分析认为,赡懿荒芡ü种苹食煞值暮铣衫捶⒒涌瓜宋饔谩A表达猰没有升高。一上海第二医科大学级博士研究生论文狟
关键词:,肝细胞生长因《肝细胞生长因子受杯‘糖尿病肾病了高糖成纤维细胞栖蜼对基因和蛋白质表达也具有促进作用。厂—矿一一抑制表达来发挥其促进细胞外基质降解的作用,起到抗纤维