文档介绍：粪便细菌学检验操作规范实验室常规检查是细菌培养,沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠杆菌作为实验室常规培养的主要腹泻病原菌。一、标本采集与运送:(1)标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。在不同的时间采集2~3份标本可以提高致病菌的分离率。(2)自然排便采集粪便标本时,取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1~3g。液体粪便则取絮状物,一般取1~3ml,直接装入粪便容器或保存液或运送培养基中送检。(3)直肠拭子采集粪便标本,检查带菌者时可以采取肛拭(棉拭先用保存液或增菌培养基湿润),深入肛门内7~10cm除采样,不能及时接种时,应将标本放入保存液内。(4)容器应清洁、带盖、广口的(不宜使用纸盒)、送检的标本中不能加入防腐剂。(1)粪便标本应尽快送检,室温条件下不能超过2h。,但不宜超过24h。使用改良Cary-Blair培养基时,不能运送培养志贺氏菌的标本。(2)直肠拭子采集的标本必须置入运送培养基或GN肉汤中送检,转运时间不宜超过2h。(3)高度怀疑霍乱弧菌感染的标本运送必须符合特殊标本的安全要求。(4)直肠活检标本用粪便容器送检,内盛少量无菌蒸馏水以防止沉淀。-6℃保存,用磷酸缓冲盐甘油溶液保存培养沙门氏菌和志贺氏菌的标本,保存培养弯曲杆菌和弧菌的标本,需加CaCl2(100mg/L)。二、标本镜检粪便标本直接镜检找到大量多核白细胞,提示侵袭性致病菌感染。如果是由肠道菌群紊乱引起的腹泻,革兰氏染色结果可以提示是酵母菌还是葡萄球菌感染。2. 革兰氏染色制备一张薄的粪便涂片,采用常规革兰氏染色方法。镜下观察是否有大量WBCs,成丛的革兰氏阳性球菌,酵母菌。,采用悬滴法暗视野(或相差显微镜)镜检,如发现细菌呈穿梭状极活泼的运动,则考虑为弧菌感染。加入O1群霍乱弧菌诊断多价血清或O139血清,显微镜下观察若运动停止则为抑动试验阳性。采用悬滴法镜检发现投镖式或螺旋式运动的细菌,革兰阴性弧形、S形或螺旋形的小杆菌,提示弯曲杆菌感染。三、,包括沙门氏菌、志贺氏菌、致泻性大肠杆菌、邻单胞菌、气单胞菌,致病性弧菌。此外,也包括可引起菌群失调的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和酵母菌。粪便标本至少应接种血平皿、HE(XLD或SS)、EMB(或MAC或中国兰)等培养基。沿海地区还需增加TCBS琼脂培养基。补充说明:(1)SS培养基对部分志贺氏菌有抑制作用。(2)常用的肠道选择性培养基(如SS等)对气单胞菌、邻单胞菌有抑制作用,初次分离时应接种血平皿和MAC。(3)若用EMB(伊红美兰)、MAC(麦康凯)等培养基培养后,未检出常见致病菌,但感染性腹泻症状明显,可重新采集粪便标本接种GN肉汤,35℃培养4-6h,再转种HE(肠道琼脂)等培养基,进一步分离培养。(4)如怀疑沙门氏菌感染,可先用SF肉汤(亚硒酸盐增军液),以提高检出率。(5)正常人体肠道内可以存在金黄色葡萄球菌,因此只有每克粪便细菌数达到105CFU时才有临床意义。(6)气单胞菌能够在常规的鉴别培养基如MAC和EMB上生长,但选择性培养基更有助于检出气单胞菌。选择性培养基