文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
口腔癌组织基因表达谱的cDNA微阵列检测结果分析
姓名:陶疆
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学(口腔内科)
指导教师:周曾同

景┳橹虮泶锲椎膃⒄罅屑觳饨峁治中文摘要结论关键词;嚣的:运矮微薄捌技术酝究蜀茳鳞坟细鼹癌组织釉癌旁组织基因方法:应用微阵列技术趸,对谇话┗颊结采:在条熬嚣中,嚣艟痰翱癌努组织阕存在整异表达豹基因。表达潜的变化,为探讨口腔癌发生的基因机制提供初步筛选资料。的癌组织及瞄一恋者酶瘸旁组织进行分孝斤。蠢嚣耱绥织孛分澍撞攥慧辏心孀>酆铣捎ü夥钟疌羧氡猠粗瓢鞅达谱探针,与微阵列芯片杂交,严格洗片后用荧光扫描仪扫描芯片获得荧光信号图象,利用计算机分析肿瘤及瘸旁组织中差异表达的基因。对所获得敕蒸霞避行分子生物信惑擎分橇。在所检测的粤俅脖瓯局校⑾钟胁钜毂泶锏幕。生物信息学分析鼹示,该条麓异表达基因岛肿瘸的发病机制可能存徽簿疑技零辘囝瓣捡测掰耱不嘲组织中多个基因的熬异表达,能为研究肿瘤发瘸机制摁供有价值的筛选资料。微阵弼在栩关·睫。口腔癌基阖袭达
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正文前言口腔癌是全世界第六大最常见癌症,而在发展中国家则高居第三位‘¨。口腔鳞状细胞癌是口腔癌中最多见的类型。尽管外科手术治疗、属预后最差的癌症之列。因此更好地理解口腔癌发生的分子决定因素为探清口腔癌发生发展的分子靶序列和作用通路,建立起口腔癌的分子模型,近年学术界对口腔癌发生相关基因进行了大量探索研究,迄今虽已发现某些基因与口腔癌的发展有很强的相关性,如,蚿分别有%,%和%邢喙匦浴恍┓肿铀平上的变化如和瓸的表达改变可能与口腔癌的发展有关ɑ蛲酚肟谇话┓⒄拐嬲囊蚬叵等杂写侗稹目前国际上较一致的观点认为,单一基因的异常不足以引起细胞恶变,口腔癌的发生发展受细胞内复杂的“基因网络”调节,更准确的描述是机体因存在着一系列调控细胞增殖、分化、凋亡基因的多环节异常并相互影响而最终致癌。对于这一事实的揭示,需要对口腔癌发生发展的多环节多基因进行高通量的检测。然而,由于受传统的分子生物学研究手段的限制,目前国内外的大量相关研究仍停留于一次实验仅检测一个或几个基因,且对待测基因的选择缺乏依据,存在着放疗、化疗都有所进展,但在过去的年中,口腔癌的晟媛嗜对改善其诊断、治疗和监测有重要意义。大量重复研究。不仅进展缓慢,而且无为的消耗了大量人力物力。
传统的对基因的逐个研究,是把某~个癌基因或抑癌基因转到培因的突变或缺失、癌基因的异常扩增和表达以及多个基因的协同作用、基因本身的多效性和机体免疫因素,都可能对肿瘤表型的表达与否起域或不同染色体上,在基因表达调控方面具有明显不同于单个基因的进行研究,以筛选出与肿瘤相关的多个环节上起作用的起关键性调控的发生发展和有效治疗有重要意义。传统的检测方法不可能担此重任,发展起来的一项前沿生物技术。其基本原理是碱基互补和分子杂交,基本步骤是将靶基因片段按高密度养的细胞或转基因动物中,或把某一个基因敲除,观察产生的生理或病理效应。这种实验对于深入了解某一基因的功能有意义,但与生理或病理状态下每一个基因的实际作用仍有距离。研究表明,肿瘤的发生和发展是一个复杂的多阶段过程,正常基最终决定。现已明确在基因表达调控、机体免疫及细胞分化等重要生命过程中有许多相关基因是成簇排列的,它们可以分布在一较大的染色质区特性。将肿瘤生长的各个阶段中共同表达的众多基因作为一个“基因群”作用的基因,才有可能揭示肿瘤在基因水平的本质,这对于预防肿瘤而微阵列技术的问世,为上述研究带来了方法学上的可行性。微阵列又称基因芯片墙改杲岷先死嗷组计划矩阵固定在玻璃或硅片等载体上,待测样品经荧光染料标记制备成探
针与芯片杂交,杂交信号用激光扫描仪检测,计算机分析结果。可靠长相关基因的表达模式。它具有被检测目标芏雀摺⒀居昧考佟⒆发展多环节多阶段间的相互协调和共同作用,以及与某种癌肿发生有目前,国内外已有不少关于运用微阵列技术筛选乳腺癌、恶性黑色素瘤等肿瘤相关可疑基因的报道【恰5ǘ话┛梢芍掳┗因的筛选,目前国内尚无报道。因此,本课题采用微阵列技术,对口腔癌及癌旁组织的表有关的基因群以及迸一步深入研究其中某些关键基因提供初筛结果。性已被许多实验的和证实⒄罅通过高通量的生物信息处理,可随时获取肿瘤细胞生长各期与肿瘤生动化程度高等特点,因而能够高效率、低成本筛选和分析差异表达基因,为快速寻找和发现肿瘤相关新基因提供线索,使研究肿瘤发生、关的基因群成为可能。达基因进行筛选,绘制口腔癌差异表达基因谱,为揭示与话┓⑸
供者信息见赵材料和方法牧表┘鞍┡宰橹┱⒕绷:细问质跚谐目谇话┘鞍癌组织为术中原发灶组织,有病理证实分级为丁0┡宰橹自有病理证实为正常的切缘组织。标本切取后立即液氮冻