文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
抗Caspase-3核酶在大鼠肝细胞凋亡途径中作用的研究
姓名:徐人欢
申请学位级别:博士
专业:内科学(传染病)
指导教师:周霞秋

ǎ抗嗣冈诖笫蟾蜗赴蛲鐾揪吨凶饔玫难芯.—猒——●中文摘要赴蛲龅姆⑸。应遗程。占整苎三墨登奎堂璧苎主翌塞生堂堡堡苎堂丛堕—————————主目前家族已发现至少余种,它们在组织分布及降解已知底物的功能上彼此有重叠现象,在不同细胞或同一细胞受到不同刺激诱导凋亡过程中激活的痪∠嗤毡槿衔8眉易宄稍眂是哺乳动物细胞质中的关键蛋白酶Ⅲ。近年来研究发现,在神经细胞凋亡中起着决定性的作用,阻断幕钚钥捎行У匾种粕窬赴蛲龅姆⑸5目的:设计并合成针对大鼠的锤头状核酶,通过体外及体内活性鉴定,筛选出活性较高的核酶。应用此核酶通过下调途径中的作用。设计并合成抗大鼠囊蛔楹嗣福ü逋庵聘骱突钚约ǎ筛选出活性较高的核酶⒊醪街っ髂茉谙赴诩羟械孜颿.。将寺〉饺植煌恼婧吮泶镌靥逯胁趾嗣福≧Ⅱ舳那逗嫌中的承,并稳定转染大鼠肝细胞株ü齊甈、、蚦蛋白酶活性测定等方法检测核酶在体内的表达活性,,同时分别转染抗核酶到蚉赴校过细胞形态学分析,流式细胞仪,⑻。Ⅱ和
黝彻趣咖唧睰细黼龅镌黻心腓肌丽刨∥核酶活性鉴定\向亡圭塑苎三曼坠奎兰丝堡主堕塞竺兰焦丝兰堡△堕————痕堡、\一/结果:我们所设计的核酶一哂辛己玫奶逋馇懈畎蠷’的活性,通过体内分析证实,嵌合于械暮嗣哂薪高的体内切割底物的活性,其在细胞内可有效地下调谋泶锎锏%左右。当转染核酶到细胞时,发现抗嗣肝茨茏瓒蟃—盏即笫蟾蜗赴蛲龅姆⑸强勺瓒螪梯带的形成。当转染相同的核酶到细胞,形态学和荽燃觳诱导的细胞凋亡工具,而且,对于将来可能的基因治疗会提供一种有效的方法。同时,我们证明,,。而在细胞中,对于诱导的凋亡起着重虯结论:我们设计的嵌合型核酶可有效且特异地在体内下调基因的表达,这不仅可作为探讨基因在细胞凋亡途径中的作用一种有效关键词:\/,
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第一章抗大鼠锤头状核酶的体外制备与体内外活性鉴定圭查苎三堕型查兰丝堕圭堕塞生兰篁丝壅—』兰笠堕—————————二量在乙型肝炎发病机理中淖饔弥饕J峭ü拗鞯拿庖叻从Φ慕榈迹在免疫介导机制中,凋亡起关键作用”8蜗赴牡蛲龆杂贖的清除至关重要,但研究发现,过度的凋亡可诱导坏死的发生及进一步加重肝内炎症的病理变化,甚至导致急性肝功能衰竭。故最近有人提出可将抑制凋亡的发生作为一种新的抗肝内炎症的方法【。凋亡介导的肝细胞死亡可以进一步加重由毒物、感染、移植排斥及可能由败血症引起的暴发型肝衰竭的肝脏损害及肝功能失代偿A硗猓捎诘蛲鲇肝衰竭患者中的应用。肝细胞凋亡的发生需要半胱氨酰蛋白酶幕罨D壳耙鸭ǔ謈酶,其中,样蛋白酶╟程中起到关键的作用删,以受到愈来愈多的关注。实验发现,,都伴随鞍酌傅募せ睢.。最近,萚研究发现,通过给缺陷小鼠注射抗固澹⑾忠吧托∈蠖哉兆楹芸煊捎诒┓⑿透窝锥劳觯而毕菪∈笤蛴捎谄涓蜗赴劳鲅映ざ婊钕吕础4搜芯拷徊街な担在固褰榈嫉母蜗赴蛲鲋校琧.ü涞蛲黾读7从χ邢掠蔚闹葱功能,而起到关键的作用。目前证实,在许多类型的细胞中ǜ蜗赴,通过抑制细胞内家族蛋白酶活性可阻断凋亡的发生及发展J笛橹っ鳎恍┒痰亩嚯如,选择性种萍可明显的抑制凋亡的发生【】,但是,由于这些多肽类抑制剂特异性较差,可同时抑制多个鞍酌福裕τ谜些抑制剂研究凋亡的过程时,无法知道单一的冈诘蛲龉讨兴鸬核酶是一种具有酶活性的肿樱谧匀唤缰泄惴捍嬖冢ü斯响生物人工肝系统中肝细胞的体外长期存活,从而也限制了人工肝在一些严重疌//。所以,目前研究和开发一种新型的特异的种萍料缘萌找嬷匾!
材料和方法一、材料:占查苎三墨型查堂望髑帝丈帽だ菘堡△塾—————————二量本研究中,我们设计并合成了能特异切割凋亡过程中关键的蛋白酶合成小分子具有催化活性的核酶与相应的底物匾旖岷希惺蛊淝懈罟能,可以帮助人们了解特定基因的转录、复制、表达及其功能等,并且由于其可能成为阻断病毒基因和其它有害