文档介绍：氨基酸的纸层析法
一、实验目的
学****氨基酸纸层析法的基本原理。
掌握氨基酸纸层析的操作技术。
二、实验原理
纸层析法(paper chromatography)是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,利用样品在两种互不相容的溶剂中分配系数的不同达到分离的目的。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时,水为静止相,他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱。将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点。
分配系数(K)=溶质在流动相中的浓度CL/溶质在固定相中的浓度CS
比移值(Rf)=从原点至层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离
三、实验仪器与试剂
1、实验仪器
试剂瓶、天平、通风橱、容量瓶、量筒、层析滤纸、直尺与铅笔、毛细管、
层析缸、电热吹风机、烘箱、培养皿(喷雾器)
2 、实验试剂:
10%异丙醇:量取50ml异丙醇,于500ml的容量瓶中定容。
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赖氨酸标准溶液: 10%异丙醇中。
谷氨酸标准溶液: 10%异丙醇中。
脯氨酸标准溶液: 10%异丙醇中。
苯丙氨酸标准溶液: 10%异丙醇中。
混合氨基酸标准溶液:量取赖氨酸标准溶液,谷氨酸标准溶液,脯氨酸标准溶液,苯丙氨酸标准溶液各20ml,混匀。
层析溶剂:正丁醇:乙酸:蒸馏水=4:1:5(350ml/缸,现用现配)
%茚三***显色液:***,溶于100ml***中。
四、试验步骤
1、滤纸的准备
取15×15cm的层析滤纸条一张,在底端2 cm处用铅笔与直尺画一横线, ,记作五种氨基酸的点样位置。
2、点样
取毛细管在每个点样处精确点样,其直径约2-3nm为宜,点2-3次为佳。(大约为毛细管管长的1/4-1/3)必须在每一滴样品干后再滴第二滴,在操作过程中应戴上乳胶