文档介绍：PCR技术简介
分子生物学技术的迅速发展,
为PCR技术的发现提供了坚实的
基础,同时也为这一技术的发展
和应用提供了宽广的舞台。
PCR技术的发明
1985年
Mullis
青年
遗传学领域
1995年诺贝尔化学奖
灵感
PCR技术的发明
1971年Korana最早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性、与合适的引物杂交、用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。
PCR原理示意图
PCR的扩增效率:
循环数. 扩增子数(靶序列拷贝数)
1 2
2 4
3 8
4 16
5 32
6 64
20 1,048,576
30 1,073,741,824(10亿)
3、PCR条件的优化
模板
引物(-1umol/L)
缓冲液(Tris-HCl 10mmol/L
KCl 50mmol/L
pH -)
镁离子(- mmol/L)
dNTP
耐热DNA聚合酶
温度循环参数
PCR的改进与完善
Mullis最初使用DNA聚合酶I的Klenow片段
不耐高温
37°C下反应
PCR技术的改进与完善
1984年Keohanog改用T4DNA聚合酶
1988年Saiki等从温泉中分离的一株嗜热杆菌(thermus aquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶
耐热性
忠实性
扩增长度
平台期