文档介绍：细菌芽孢染色法
原理:
芽孢壁厚、透性差、不易着色,无法用单染色的方法使其着色。用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而进入芽孢的染料则难以透出。当用对比度大的复染色剂[复染液(如番红液)或衬托溶液(如黑色素溶液)]染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,使芽孢和菌体更易区分。
操作步骤:
方法一:
制备菌悬液:加10滴无菌水于小试管内,用接种环挑取2-3环
菌苔于试管内,搅拌均匀,制成浓的菌悬液。
染色:加苯酚品红染液15-18滴于小试管内,并使其与菌液混合
均匀,然后将试管置于沸水浴的烧杯中,加热染色3-5分钟。
涂片固定:用接种环挑取试管底部菌液2~3环于洁净载玻片上,
涂成薄膜,然后将涂片通过火焰3次温热固定。
脱色:95%乙醇脱色,直至流出的水无红色为止。
水洗,滤纸吸干
复燃:取1~2接种环黑色素溶液于涂片处,立即展开涂薄,自
然干燥。
镜检:油镜观察在淡紫灰色背景的衬托下,菌体为白色,菌体
内的芽孢为红色。
方法二:
1.  将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂
片、干燥、固定。
2.  滴加3~5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
3.  用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切
忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸
汽时开始计算约4~5分钟。这一步也可不加热,改用饱和的
孔雀绿水溶液(%)染10分钟。
4. 倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
5. 用番红水溶液复染1分钟,水洗。
6. 待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色。