文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用
姓名:陈红兵
申请学位级别:硕士
专业:临床检验诊断学(免疫学测定)
指导教师:罗伟
、在形成过程中,凝血酶裂解抗凝血酶的浑募果比较,两者相关系数为,具有非常显著的意义.!⒀/并以凝血酶丝氨酸活性中心结合抗凝血酶的位,两者构象凝血酶一抗凝血酶复合物检测方法的建立及其初步临床应用体内凝血酶原激活成凝血酶琙螅杆俦豢鼓C珹结合,生成共价键相连的无活性不可逆复合物此维持凝血一抗凝血之间的生理平衡,目前认为该复合物的形成是凝血酶血系统的激活情况,是研究生理病理状态下凝血系统行为的一项有用指均发生一定的改变,呈现出一定的新抗原表位。因此,用庖咝∈罄时减少与疤宸肿拥慕徊娣高和特异性好的单克隆抗体,同血酶,然后两者按一定比例体外反应,即可得到浓度和纯度均较高的复合物焙猩倭緼投嘤嗟哪C。以该反应的混合物免疫小对和特异针对凝血酶的单抗。经过抗体配对试验,用针对哪C覆课坏蘑诺タ棺鞑痘窨体,用针对鼓C覆课坏蘑蠛趴固遄髅副昙觳饪固澹⒘思觳乃ǹ固寮行姆噶C庖呶绞匝椤8梅ǖ南咝约觳夥段一中文摘要凝血酶一抗凝血酶复合物猘琓生成的直接证据,标志凝血系统的激活。检测难=娇梢约嗖饽标。一制备单克隆抗体可以得到针对利用肝素一柱从人血浆中提取凝血酶和抗凝鼠,我们制备了一系列特异和非特异针对牡タ寺】固澹⒌玫搅颂—.疞,批内为%一%,批间为%<尤癵/的和凝血酶原对觳馕抻跋臁<觳例含高、中、低值的血浆标本,与用美国公司的试剂盒检测的结一
/关键词:凝血酶禽抗凝血酶复合物层折初步临床应用表明,健康年轻女性较健康年轻男性灾龈撸妇及子宫肌瘤患者灾摺P募」K阑颊哂绕涫浅戮尚孕募」K阑巳苊敢豢瓜,纤维蛋白降产物灾喙亍8尾⑾恶性肿瘤、急性白血病患者蚕灾摺在预测心肌梗死、监视的凝血系统行为提供了一个有用的工具。年德国笛槭医⒘薚检测方法,他们应用兔抗人凝血酶的多抗作捕获抗体,用兔抗人的抗凝血酶的多抗作检测抗体。与之比酶联免疫吸者仙灾矣隤—溶酶复合物珼一二聚体妊娠、肝炎等高凝状态具有很大意义。以上结果表明,该法可用于检测血浆NF拦郎怼⒉±碜刺较,该法则采用亲和力和特异性均较强的单抗建立觳夥椒ǎ畈沽国内觳饽芰Φ目瞻缀凸噬细梅椒ㄑ系目瞻住单克隆抗体附试验临床应用。。、
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露。在血浆游离凝血酶生成后此玊二联复合体立即与之结合,形成—毙孕募」K进行早期诊断、预测再闭塞、考察溶栓疗效¨汕至夹院投裥灾琢觥⒓嗍痈究瓢┲⒌淖别免疫家兔,以此获得的多抗再过交联有拿庖咔缀筒阄鲋镁W源耍梅ńソゴ媪闔萚建立的放射免疫法豢言凝血酶一抗凝血酶复合物猘珹,形成肝素一二联体—,使抗凝活性基团暴狧三联复合体,凝血酶酶解并与之形成共价键,凝血酶失活,两者构象均有一定程度改变引。此后肝素脱离,稳定纬伞国外研究表明,检测郧癉—有高的敏感性和特异性,深静脉血栓纬蒣,可作菩е副辍<觳釺可对移‘·川。可作为肝病严重程度和死亡预测指标引。苍谌焉铩⒏染、类风湿病等升高年,德国笛槭襊萚以人凝血酶和抗凝血酶分步骤纯化、与星缀土Φ耐每谷四C付嗫刮2痘窨固澹隩有亲和力的酶标兔抗多抗作为检测抗体,建立了双抗体夹心法醇觳为兔抗刮C嘌蚩雇玫乃ǹ固宄恋矸,并一直沿用至今。觳獾牧俅惨庖逡苍嚼丛绞艿焦诹俅采系闹厥樱约梁械募高、纯化方便、纯度高、检测本底低、交叉反应小等优点。采用制各引琓人体内凝血和抗凝血相互作用以维持生理平衡的产物,是凝血酶琓珊湍O低臣せ畹谋曛疚镏弧肝素,催化男纬桑紫雀嗡亟岷峡鼓C删軹值对性血管内凝血姓锒虾头旨禰。检测稍げ釪格相当昂贵,一般患者难以承受。因此,自行建立募觳夥椒ū憔哂辛撕艽蟮纳缁嵋庖濉众所周知,单克隆抗体较多抗有很多优越性,如:特异性强、亲和力稚
网啪牟稬删禙ほ緄鱰癷删糅緄琂鏹。贘城幽唧獸禜&页竺谷鵐蟆隻叫贼耐蛔::糅緉鬾隦出田緉﹚鷈鎛剥:刚科飞形醇猩唐烦鍪郏琓即使在血清中含量也很少,不足以提抗凝血酶、从旌衔锏木勐纫蚁┌宀捎眉浣覧法一起筛选克隆呈现出一定的新抗原表位。据此,以春衔镏苯用庖咝∈蠼嫌肨前体分子分别免疫小鼠来制备单克隆抗体应更为合理。取。有报道媒洗罅康腡前体分子凝血酶和抗凝血酶体外反应,再过的凝血酶R愿梅从Φ幕旌衔镏苯用庖連痗小鼠,然后取小鼠脾细胞株,制备一系列针对湍C傅牡タ寺】固濉R源宋;。检测募行姆‥。并通过方法学评价和初步临床应用,对单抗的方法,还可避免制备昂贵的庖咔缀筒阄鲋苊饷庖咔缀筒析后抗体亲和力的下降。谛纬晒讨校C负涂鼓C腹瓜缶⑸欢ǔ潭鹊母谋洌分子筛层析提纯捎谀C负涂鼓C复科泛苣鸦竦茫梅ㄊ导士行性不大。为此,我们拟利用肝素一缀筒阄