文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
纳米磁性材料纯化VEGF质粒的研究
姓名:孙敏莉
申请学位级别:硕士
专业:普通外科学(血管)
指导教师:张柏根;张皓

中文摘要弧⒀9苣谄どひ蜃柿5睦┰黾跋妇呀馍锨逡旱闹聘在临床医学预防和治疗领域中,质粒作为安全性高的基因载体在基因治疗和磁性纳米粒子且恢志哂刑厥獯叛灾实某⒖帕#哂谐炒判裕且粒径小,比表面积大,偶联容量高,悬浮稳定性好,可在其表面偶联特定基团再进行质粒扩增,用碱裂解法制备细菌裂解上清液,此上清液中即含有质不符合质粒作为载体的需要。用共聚沉淀法制备—械缇导觳猓玫狡骄>对嘉的粒子;用鹾戏从υ诤恤然诺腗表面分别进行探针和链霉亲和素的连接,链霉亲和素连接上后,用生物素一碱性磷酸酶进行定性检测,疊显色反应证明狭由狭疵骨缀退兀梅派湫缘獗昙欠ń卸考觳猓峡梢粤由狭疵骨缀退亍:铣缮锼亓拥奶秸耄隡形成三螺旋磁含羧基的希票赋商秸胫苯恿拥拇判阅擅琢W印用制各好的三种谙妇呀馍锨逡褐刑岽恐柿#岽砍龅闹柿=蟹光光度计检测量和纯度,并琼脂糖电泳观察提纯出的质粒是否混有推渌基因疫苗中显示极大的应用前景,传统的质粒纯化均存在操作繁杂、接触试剂的毒性以及商品化质粒纯化系统价格昂贵等问题,因此开发性价比高、操作简单、快速、无毒的质粒纯化系统是本实验的目的。应用于生物分离技术。本实验探讨了在磁性纳米粒子外连接不同基团,提纯质粒。先制备蟪Ω司惺芴赴缓笥寐然品ń蠽柿W;粒。按试剂盒说明操作和传统方法进行质粒的提纯,提纯出的质粒用紫外分光光度计检测。虽然普通方法提纯出的质粒量比试剂盒高,但其中混有的杂质较多,二、三种超顺磁性纳米粒子的设计及制备性纳米粒子,惶秸胪ü鼸法直接连接在三、三种岽縑柿R约爸柿5募觳杂质,用软件设计基因引物,合成引物进行┰觯┰霾锝械琍。上海第二医科大学硕士学位论文。
关键词质粒纯亿。磁性纳米粒子超顺磁性泳观察,结果表諱均能提纯出质粒,电泳图象中未见杂质及其它核酸,紫外分光光度计检测三种拇慷龋8叽慷取电泳图象显示果符合设计要求。提纯出的质粒送交测序,结果显示目的基因符合文献报道,说明岽恐柿7椒ú换岣谋洳迦氲哪康幕颉;А根据本实验的研究结果,我们可以认为:①用磁性纳米粒子的物理特性及其超顺磁性,可以从含有质粒的细菌裂解上清液提纯质粒。②三螺旋结构法提纯质粒由于影响因素复杂,故得率较低。③利用的离子交换法可以提纯出高纯度和高得率的质粒。④本实验结果的意义在于:利用磁性纳米粒子可以从细菌裂解上清液中提纯目的基因以供治疗需要;从复杂的混合物中,通过不同设计制备的磁性粒子提取特定的目的物,作为临床检测手段。离子交换三螺旋结构链霉亲和素生物素/上海第二医科大学硕士学位论文
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前言巍在临床医学预防和治疗领域中,基因治疗和基因疫苗的应用己显示出不可估基因治疗中使用的经遗传学修饰的逆转录病毒、腺病毒作为载体时,存在肉注射。但是导入的外源性基因在靶组织中表达效率较低和持续时间较短,需治疗用的质粒唤鲂枰W愎淮蟮牧浚矣Ψ弦┪锏谋曜肌T又始污染物可诱导免疫学和生物学应答,影响质粒的安全性和效力,这与质粒的纯度为:#荒诙舅兀内毒素单位/质粒;环状%等等。因此,如何获得高纯度和高质量的质粒在基因治疗临床应用中占有重要地位,”。针对药物级质粒的生产,科学家们正进行着各种探索。传统的质粒提取方法是色体组蚏蠖嗍柿大分子可通过滤膜并在过滤液中复性,高纯度和高得率的质粒,但耗时、费力,且层析柱价格昂贵,使得质粒生产的性不适用于治疗用。寻找一种简单、无毒、快速、成本低的质粒提纯方法是基因治疗中期待亟待解决的问题之一,也是本实验的目的。磁性纳米粒子且恢志哂刑厥獯叛灾实某⒖帕!K拇判杂氪块材料显著不同,大块的纯铁矫顽力约为判阅擅琢W又本缎∮谝定数值时,其矫顽力反而降低到零,呈现超顺磁性,即在磁场中具有磁性,撤离量的前景。美国微生物学会总结近年来呙缭诙锸笛橹械淖钚陆梗为此项技术将开创了人类疫苗接种的新局面。在基因治疗方面,接受基因治疗临床试验的病例已超过位,尽管基因治疗的疗效还不十分明确,但为难治性疾病和目前的“绝症”带来了新希望【。安全性问题。使用插入质粒的基因合成物不仅安全,而且能像传统药物一样肌要反复给药,因而需要毫克级的质粒缰瘟坪谏亓觯湫偷募亮渴直接有关。因此在摄取和生产工艺过程中,必须符合治疗要求的纯度、效力、均一性、有效性及安全性等特定规格口@缭谥琢龅闹瘟浦校柿5墓娓痬柿#蛋白质,碱裂解法,用氯化铯梯度离心进行纯化,此种方法存在细胞污染物、氯化铯有一定的细胞毒性等问题。等用硝酸纤维素膜选择性的阻留质粒中混有的核酸而变性的单链