文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
去甲基化剂对胃癌RASSF1A表达及生物学行为的影响
姓名:杜鹏
申请学位级别:博士
专业:外科学(普外)
指导教师:张一楚
20040401
去甲基化剂对胃癌泶锛吧镅形5挠跋中文详细摘要在肿瘤发生多阶段癌变过程中,癌基因的激活和/或抑癌基因的失活为其中两个重要的分子学事件。肿瘤学研究发现,启动子区高甲基化异常是导致许多肿瘤抑制基因表达异常的内在机制。相对于引起结构异常的基因变异机制,属于表观遗传学机制的谆J剿孀畔赴至芽傻玫轿榷ǜ粗坪鸵糯ǎ甲基化的异常更易于被逆转,在癌变过程中,使异常甲基化逆转,特别是在癌变早期阶段的转变,对于肿瘤的防治尤为重要。由于高度甲基化而暂停表达的抑癌基因,如果能应用去甲基化制剂逆转甲基化的异常状态,使之重获表达,理论上即可发挥其抑制肿瘤细胞生长的功能。已有研究证实,呒谆斐?梢增加肿瘤细胞对烷化剂等化疗药物的抵抗性,降低化疗疗效。因此,肿瘤治疗中通过去甲基化剂的协同应用,以提高化疗敏感性的研究,已成为~个新的研究热谆鹘诨虮泶铮承┮职┗蛟谥琢龇⑸写嬖谧鸥呒谆失活均已得到广泛证实。’—通过去甲基化作用可使多种含有肿瘤的基因治疗提供了一个新的思路。胃癌治疗中应用相应的去甲基化制剂以改变胃癌细胞的生物学行为,并提高化疗效果的研究,目前尚未见报道。喙毓δ苡蚣易錶年新近在肺癌研究中克隆出的一个候选抑癌基因,已证实具有抑制肿瘤细胞生长的功能,定位于。K淙灰延醒芯恐っ鞲没蛟诩鬃聪侔⑸霭⒈咽癌、乳腺癌等多种肿瘤中失活,但谖赴┳橹械谋泶镒纯觯壳旱母呒谆职┗蛑匦卤泶铮佣指匆职┕δ埽庖谎芯拷峁杂尚未见报道。本研究采用免疫组织化学方法检测胃癌组织中抑癌基因谋泶锴况,对缺失表达的胃癌细胞株应用去甲基化剂狢诱导处理,结合甲基化,是点。5鏭拳博±毒甲羞6砸话㏑裹耘省N!抻跋
胃癌细胞中蛞斐;疲⒃—碇琢鱿赴螅晕赴统计分析采用软件进行,敌∮。诒狙芯恐校6哉瘴缸橹瓯局芯杉鸕阳性表达细胞,着色集中于细胞胞浆。通过计算阳性细胞表达率,例胃癌组织标织泶锩飨圆煌头只┙现蟹只透叻只┍泶锵灾少妒.;泶锿赴┑腡分期笊疃龋琍.,;中晚期騃、期赴㏑表达分数。±,晡赴细胞中和醇泶铮琈细胞存在着后,和觳獬鯮表达,处理后免疫组织化学亦证实贏细胞中恢复表达:峁显示,未表达奈赴┫赴鸖、癕均由甲基化引物出现相应的条带,而由菲甲基化引物未能扩增出相应的株胃癌细胞经两种不同浓度砗螅攵哉兆橄啾龋速度出现不同程度减慢,其中以虯两株改变为甚;经流式细胞仪检测分析,晗赴廾飨缘腉凇疢期阻滞作用,细胞凋亡率由%%,赴喑鱿值蛲雎敏感性聚合酶链反应,细胞在生长活性、细胞周期、凋亡以及对化疗药物敏感性等方面进行分析,初步探讨去甲基化剂瓹对胃癌细胞生物学行为的影响,为胃癌的发生机制和基因治疗提供有意义的数据和理论依据,结果显示:本中泶镅粜韵赴飨约跎徊煌只潭任赴┳虻谋泶铩街峙ǘ×缶疞、巧鬖砦赴┫赴∈产物;妥魑Q粜远哉盏腍赴黾煞羌谆锏睦┰,。产物。鏭拳博±毒甲羞6砸话㏑裹耘省N!抻跋
的生长伊.,二者应用联合,与单用楸冉希琈细胞未见显著差异溆株胃癌细胞均可见明显疗效差别:┪锎砦廾飨员化.,在细胞株尸.、.杉:嫌τ每擅飨蕴岣呋埔┪一作用疗效。:N缸橹写嬖谧乓职┗騌表达,胃癌组织该基因表达量显著性降低,不同分化程度和临床分期,谋泶锎嬖诿飨圆异,谋泶锟勺魑F拦牢赴┒裥猿潭群驮ず蟮囊幌钣幸庖宓胃癌细胞中嬖谌笔П泶铮舳忧呒谆F湟斐5闹要机制,去甲基化剂瓹可以逆转并恢复基因的再次表达。┫赴纳せ钚裕韵赴芷谖显著影响,具体作用机制尚不清楚。ゼ谆可显著增强化疗药物顺铂、氟脲嘧啶对胃癌细胞的杀伤作用,.联合应用为胃癌的治疗方式提供了一个新的思路。ゼ谆恢复胃癌细胞抑癌基因表达的作用具有一定的可从ピ黾又.%.%;秏/疞浓度珻处理赴榻隙哉兆橄赴寺⌒%ザ烙τ萌ゼ谆和化疗药物飨砸种莆赴┫赴指标。遗传性。关键词:胃癌细胞甲基化T右’.±毒甲羞6砸话㏑裹耘省N!抻跋
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